โปรตีนนั้นสร้างจากโซ่ของกรดอะมิโนแต่ละชนิดนั้นมีค่า pH ที่แตกต่างกัน ค่า pH โดยรวมของโปรตีนนั้นประกอบด้วยส่วนผสมของค่า pH ของกรดอะมิโนแต่ละตัวเมื่อพวกมันก่อตัวเป็นไอออนในสารละลายเฉพาะที่พวกมันถูกละลาย จุด isoelectric (pI) ของโปรตีนคือ pH ที่โปรตีนนั้นไม่มีประจุสุทธิ คุณสมบัตินี้สามารถนำไปใช้ประโยชน์ในการแยกโปรตีนด้วย pI ที่รู้จักจากโปรตีนอื่น ๆ ในส่วนผสมที่ต่างกัน
กรดอะมิโนมีกลุ่มขั้วอะมิโนที่เป็นพื้นฐานมีค่า pH สูง ปลายอีกด้านของกรดอะมิโนคือขั้วคาร์บอกซิลที่เป็นกรดโดยมีค่า pH ต่ำ ที่ค่า pH ต่างกันกรดอะมิโนในโปรตีนจะแตกต่างกันไปในประจุ โปรตีนที่อยู่ใต้จุด isoelectric จะมีประจุเป็นบวก ในทางตรงกันข้ามคนที่อยู่เหนือจุดนี้มีประจุลบ
เพื่อใช้ประโยชน์จากความรู้เกี่ยวกับจุดไอโซอิเล็กทริกสำหรับการทำให้บริสุทธิ์โปรตีนส่วนผสมของโปรตีนจะถูกส่งไปยังสนามไฟฟ้า โดยทั่วไปจะทำใน agarose หรือ polyacrylamide gels และเป็นที่รู้จักกันในชื่อ isoelectric focus เทคนิคที่เก่ากว่าคือการทำตามขั้นตอนในขนาดที่ใหญ่ขึ้นในคอลัมน์แก้วโดยใช้สารละลายซูโครสที่มีขั้วไฟฟ้าที่ปลายแต่ละด้าน สารประกอบที่เรียกว่า ampholytes ถูกเพิ่มเข้ามาซึ่งทำให้เกิดการก่อตัวของการไล่ระดับ pH ที่สอดคล้องกัน เมื่อเจลหรือคอลัมน์อยู่ภายใต้กระแสไฟฟ้าโปรตีนจะเคลื่อนที่จนกว่าจะถึงจุดไอโซอิเล็กทริกของพวกเขาจากนั้นยังคงอยู่กับที่
โดยทั่วไปโปรตีนในเจลนั้นสามารถมองเห็นได้ด้วยสีย้อมที่จับโปรตีน บางครั้งหากมีการศึกษาเอ็นไซม์ก็สามารถใช้วัสดุพิมพ์ที่ทำปฏิกิริยากับสีได้ โดยทั่วไปจะใช้มาตรฐานที่มีโปรตีนของจุด isoelectric ที่รู้จัก
เมื่อมีใครรู้ว่าโปรตีนที่ต้องการตั้งอยู่เทคนิคทั่วไปคือการตัดโปรตีนที่แยกได้จากเจล โปรตีนนั้นสามารถทำให้บริสุทธิ์และเป็นลำดับ เมื่อทราบลำดับสามารถใช้ออกแบบไพรเมอร์สำหรับปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (pcr) และใช้ในการโคลนยีนสำหรับโปรตีนหากมีวัสดุกรดนิวคลีอิกที่เหมาะสม
การโฟกัสด้วย Isoelectric เป็นวิธีการทั่วไปในการวิเคราะห์โปรตีนที่เกี่ยวข้องอย่างใกล้ชิดเพื่อดูว่าพวกมันแตกต่างกันอย่างไร ภาวะแทรกซ้อนหนึ่งอาจเป็นไปได้ว่าโปรตีนจะมีน้ำตาลอยู่ด้วย สิ่งนี้เรียกว่า glycosylation และสามารถส่งผลกระทบต่อ pI ของโปรตีน มันอาจดูเหมือนว่ามีโปรตีนหลายชนิดที่มีคะแนนไอโซอิเล็กทริกที่แตกต่างกันเมื่อในความเป็นจริงมีเพียงโปรตีนเดียวที่มี glycosylated ที่แตกต่างกัน โปรตีนที่บริสุทธิ์โดยวิธีมาตรฐานเช่นโครมาโตกราฟีบางครั้งจะถูกวิเคราะห์โดยการโฟกัสแบบไอโซอิเล็กตริก
