Moleküler Ağırlık Markörü Nedir?

Bir moleküler ağırlık markörü, jel elektroforezine maruz kalan moleküllerin büyüklüğünün bir tahminini sağlamak için kullanılan bir moleküldür. Bu, bir jel üzerindeki elektrik akımı kullanılarak DNA, RNA veya proteinlerin boyuta göre ayrıldığı bir tekniktir. Bu terimin genetikteki moleküler belirteçlerle karıştırılmaması gerekir - bir organizmanın DNA'sının popülasyonun geri kalanından farklı olduğu ve bir DNA probu ile tanımlanabileceği alanlar.

Protein moleküler ağırlık markerleri, proteinler jel elektroforezi ile ayrıldığında yaygın olarak kullanılır. Moleküler ağırlık markörü, genellikle belirli bir boyut aralığında biyoteknoloji şirketleri tarafından temin edilen, bilinen moleküler ağırlıktaki bir protein grubudur. Biri üzerinde çalışılan numunelere dayanarak boyut aralığını seçer. Moleküler ağırlık markerleri birlikte yüklenir ve çalışma sırasında ayrılır. İşaretçiler ve ilgilenilen protein tarafından kat edilen mesafeyi ölçerek, deney proteininin büyüklüğü belirlenebilir.

Farklı şekillerde farklı belirteç tipleri görselleştirilebilir. Moleküler markörlerin bazıları etiketsizdir ve kalan proteinlerle jelde lekelenir. Tüm jel lekelenene kadar görünmezler. Diğer protein moleküler markör tipleri renklerle önceden boyanmış halde gelir ve her protein tipi farklı bir renktir. Ayrılma, jel çalışırken görülebilir.

Önceden boyanmış bir moleküler ağırlık markörünün bir avantajı Western blotlar içindir. Bu, proteinlerin bir membrana aktarıldığı ve daha sonra belirli bir proteini tespit etmek için antikorlarla boyandığı bir tekniktir. Renkli işaretleyicilere sahip olmak, işlemlerin geri kalanıyla devam etmeden önce proteinlerin transferinin tamamlanıp tamamlanmadığını belirlemeye yardımcı olur.

Moleküler ağırlık markerleri, jellerde DNA analizinde yaygın olarak kullanılır. Sıklıkla, DNA moleküler markörleri bakteriyel virüs lambdalarından yapılır . Sınırlama enzimleri istilacı organizmaların DNA'sını sindirmek için bakteriler tarafından yapılır ve kısıtlama enzimi HindIII sıklıkla lambda DNA'sını bozmak için kullanılır. DNA merdiveni olarak bilinen bir dizi farklı boyutlu, tekrarlanabilir parça üretir. Standartlar tarafından uygulanan mesafeyi logaritmik bir ölçekte karşılaştırarak, analiz edilen DNA fragmanlarının büyüklüğü belirlenebilir.

Bu DNA moleküler ağırlık markörü, genlerin izolasyonu sırasında ve DNA'nın genetik mühendislik deneylerinde üretilen DNA'nın boyutunu analiz etmek için kullanılabilir. Ayrıca küçük miktarlarda DNA veya RNA'nın büyük miktarlarda ürün üretmek üzere çoğaltıldığı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) sırasında da kullanılabilir. PCR teknikleri yaygın olarak babalık testi ve adli tıp bilimi ile ilişkilidir, ancak tıbbi ve temel biyolojik araştırmalarda da çok yaygındır. Bazı PCR türlerinden veya küçük RNA moleküllerinden üretilen daha küçük ürünler için özel moleküler ağırlık markerleri bulunur.