Peptit Arıtma Nedir?

Peptitler, amino asitlerden oluşan küçük polimerlerdir. Birçoğu biyolojik olarak aktif olarak hormonlar, toksinler veya başka yetenekleri vardır. Bu tür bileşikler biyolojik, tıbbi ve kimyasal araştırmalarda sıklıkla kullanılır. Ayrıca, sayıları birbirine bağlandıklarında proteinlerin yapı taşları olarak da işlev görürler. Peptit saflaştırması, arzu edilen bir peptidin büyük miktarlarını saflaştırmak veya proteinlerin sindiriminden üretilen peptitleri ayırmak için kullanılan bir tekniktir.

Peptitlerin saflaştırılması, farklı bir fiziksel matrise bağlanan bileşikleri ayırmanın bir yolu olan bir kromatografi tekniği kullanılarak gerçekleştirilir. Yüksek basınçlı sıvı kromatografi (HPLC), peptid saflaştırması için yaygın olarak kullanılır. Peptit veya peptitler, yüksek basınçta küçük boncukların bir kolonuna pompalanırken zamanla değişen bir çözücü karışımına uygulanır. Farklı peptitler değişken zaman noktalarında elüt edilir ve sıklıkla bir UV spektrofotometresi olan bir monitör tarafından tespit edilir.

Peptitler üzerinde araştırma yaparken, genellikle ilgilenilen madde nadirdir ve kimyasal şirketlerden satın alınamaz. İstenilen peptidin yapısı biliniyorsa, bileşiği doğal kaynaklardan izole etmek yerine, kimyasal olarak peptid sentezi ile hazırlamak genellikle daha kolaydır. Doğal ürün izolasyonu ün olarak zor. Sentetik peptitler genellikle HPLC ile saflaştırılır.

Bu tür bir kimyasal sentez, kimyager olmayan bağımsız bir araştırmacı için zor olabilir. Sık sık, bu görev, bu tekniklerde uzmanlaşan peptid sentezi şirketlerine devredilmiştir. Bu, sistemi laboratuarda sıfırdan kurmaya çalışmaktan daha ekonomik olabilir. Peptid şirketleri, araştırmacının ihtiyaçlarına göre özel peptidler yapabilir.

Peptit saflaştırmasının diğer bir nedeni, bir araştırmacının bir proteini saflaştırması ve kimliğini belirlemeye çalışması olabilir. Proteini peptid fragmanlarına dönüştürebilir, fragmanları saflaştırma yoluyla ayırma ve kolondan ayrıştırırken kütle spektrometresi ile tespit edilen peptitlerin fragmantasyon modeline sahip olabilir. Bu teknik, sıvı kromatografi-kütle spektrometrisi için kısa olan LC-MS olarak bilinir. Parçaların moleküler ağırlığını ve amino asit kompozisyonunu verir ve daha önce benzer veya aynı olanlar tanımlanmışsa, proteinlerin tanımlanmasını sağlar.

Birçok araştırmacı, olağandışı biyolojik aktiviteleri olanları denemek ve bulmak için doğal olmayan amino asitler gibi yeni özelliklere sahip peptidlerle çalışır. Bu yeni peptidlerin çalışmasına adanmış peptidomimetikler adı verilen bir alan vardır. Genellikle, bilgisayar tarafından oluşturulan diziler tasarlanır ve bir dizi atipik peptidi kapsayan bir peptid kütüphanesi sentezlenir. Biyolojik aktiviteyi test etmek için saf peptid sağlamak üzere bu kütüphanenin bireysel üyelerini ayırmak için peptit saflaştırması kullanılır. Bu strateji, piyasada mevcut en az bir yeni ilaç üretmede başarılı olmuştur.

Biyolojik olarak aktif peptitlerin çoğu, tıbbi kullanımlar için ilgi konusudur. İnsülin gibi ticari olarak kullanılan bileşikler yaygın olarak, istenen miktarda büyük miktarda üreten rekombinant DNA aşırı ekspresyon sistemleri ile üretilir. Sık sık, peptitler, cephelerine bir çeşit etiket ekleyerek saflaştırmayı kolaylaştırmak için genetik olarak tasarlanmıştır. Bu, peptidi saflaştırmak için afinite kromatografisinin kullanılmasına izin verir.

Bu tip kromatografi ile, etiket, etiketi bağlama kabiliyeti için seçilen, nikel benzeri bir boncuk matrisini bağlayacak olan histidin gibi bir bileşiktir. İstenmeyen proteinler ve peptidler genellikle bağlanma olmadan kolondan geçer. Özel olarak tasarlanmış peptit genellikle kolona kuvvetlice bağlanır. Kirletici proteinler ve peptitler yıkandıktan sonra, istenen peptid, matrise bağlanma için rekabet eden bir bileşik ile ayrıştırılır. Bir sonra istenen peptidin oldukça saf bir preparatı vardır ve etiket, yarılma yoluyla çıkarılabilir.