Poliakrilamid Jel Nedir?

Poliakrilamid jel, elektroforezde yaygın olarak kullanılan, farklı büyüklükteki molekülleri veya partikülleri bir jelden geçirerek ve elektrik akımı uygulayarak ayırma işlemidir. Poliakrilamid jeli için farklı tarifler vardır, ancak tipik olarak akrilamid, su, bir tampon, amonyum persülfat (APS) ve tetrametiletilendiamin (TEMED) içerir. Bu jel, yüklerine ve boyutlarına göre bileşikleri ayıran bir matris olarak işlev görür; Jel çözeltisindeki daha fazla akrilamid, daha küçük moleküllerin daha iyi ayrılması. Tipik olarak bu jel, protein ve DNA ayrımı için kullanılır.

Elektroforezde, bir elektrik alan, yüklü parçacıkların farklı büyüklükteki parçacıkların ayrılmasına neden olmak üzere bir elek gibi işlev gören bir jel boyunca hareket etmesine neden olur. Jel, elektrik akımından üretilen herhangi bir ısıyı emecektir. Poliakrilamid jeli bu prosedürde yaygın olarak kullanılır, ancak benzer bir jel oluşturan başka bir kimyasal olan agaroz da kullanılabilir.

Jeller, yaklaşık% 6 ila% 15 arasında değişen akrilamid miktarı ile değişen konsantrasyonlarda yapılabilir. Jeli karıştırırken, akrilamid polimerleşmemiş, yani tek moleküller olarak kalmıştır. TEMED gibi bağlanmayı destekleyen başka kimyasalların eklenmesi moleküllerin uzun zincirler oluşturarak birbirine bağlanmalarını sağlar - poliakrilamidin "poli" kısmı.

Poliakrilamid jelin ana avantajı, bağlantı akılarının ve sertliğin sayısının başlangıçtaki akrilamid ve eklenen TEMED miktarına göre kontrol edilebilmesidir. Akrilamid konsantrasyonundaki ana faktör, analiz edilen molekülün büyüklüğüdür. Bileşikler ne kadar küçük olursa o kadar akrilamid gerekir; çok küçük parçacıklar, yüzde 15'lik en yüksek konsantrasyon kullanılarak ayrılır.

Akrilamid jeldeki sürtünme miktarını kontrol ederek çalışır; jelin sertliği sürtünme miktarını belirler. Büyük olan bileşikler, boyutları nedeniyle doğal olarak daha fazla sürtünme veya direnç olduğundan jelin içinden daha yavaş hareket eder. Daha az sürtünme olduğundan daha küçük bileşikler daha hızlı hareket eder. Küçük bileşiklerin jelin hareket etmesini önlemek için, daha fazla sürtünme oluşturmak üzere daha fazla akrilamid eklenir.

DNA poliakrilamid jeli, farklı uzunluktaki DNA ipliklerini ayırmak için kullanılır. DNA parçaları, her bir ipliği oluşturan bileşikler, bir nükleotit kadar az ile ayrılacaktır. Hangi parçaların belirli boyutlara atıfta bulunduğunu bilmek için, bilinen bir boyutta parçalar içeren bir standart, numuneler ile birlikte yaygın olarak kullanılır. DNA parçaları daha sonra standart ile karşılaştırılır ve iplikçiklerin boyutu belirlenir.

Proteinlerin, çoğunlukla kandakiler ölçüsünü belirlemek için benzer bir prosedür kullanılır. Kan iki ana tip protein içerir: çok küçük, negatif yüklü bir protein olan globulin, büyük boyutlu bir protein ve serum albümini. Poliakrilamid jel kullanılarak ayırma, her tipin miktarını belirlemek için kullanılır.