O que é sequenciamento de DNA?
O sequenciamento de DNA
é uma coleção de métodos científicos para determinar a sequência das bases nucleotídicas em uma molécula de DNA. Todos os organismos vivos têm DNA (ácido desoxirribonucleico) em cada uma de suas células. Cada célula em um organismo contém o código genético para todo o organismo. O processo de sequenciamento de DNA transforma o DNA de um determinado organismo em um formato que pode ser usado pelos pesquisadores para o estudo básico de processos biológicos, pesquisa médica e em forense.
Existem vários métodos que podem ser usados no sequenciamento de DNA. Os primeiros métodos foram desenvolvidos na década de 1970 e são muito trabalhosos e demorados. A reação de sequenciamento mais popular e comum usada hoje é o sequenciamento de dideoxycleotídeo, que pode ser feito manualmente ou por máquinas, dependendo da quantidade de material a ser sequenciada.
A quantidade de material genético em um organismo varia consideravelmente e é medido pelo número de bases nucleotídicas que ele contém. Por exemplo, um vírus ou bactériaPode ter até cinco mil bases, enquanto o genoma humano contém cerca de três bilhões de bases. O método de seqüenciamento de Dideoxinucleotídeos de sequenciamento de DNA pode sequenciar muitos genomas em dias e grandes genomas em anos, em vez de décadas.
Existem quatro estágios no sequenciamento de DNA. Primeiro, o DNA deve ser removido da célula. Em seguida, ele passa por uma reação de sequenciamento. Em seguida, o DNA é separado por tamanho e, finalmente, analisado por um computador que coloca os resultados em um formato utilizável.
O primeiro passo no seqüenciamento de DNA é tirar o DNA da célula. Isso pode ser feito mecanicamente ou quimicamente. O DNA vem em dois fios, mas apenas uma fita pode ser sequenciada por vez.
Depois que o DNA é quebrado, ele é colocado em vetores, que são células que se auto-replicarão indefinidamente, juntamente com um primer, que é um produto químico que inicia o processo. Isso cria clones do DNA doO organismo que está sendo sequenciado. A reação de sequenciamento usa o iniciador para iniciar o processo químico de reproduzir a segunda fita de DNA. O sequenciamento é realizado em um ciclador térmico para que a reação seja repetida muitas vezes. Repetir a reação resulta em um maior rendimento do DNA sequenciado.
Após o seqüenciamento, o DNA é classificado pelo tamanho por eletroforese capilar. O DNA é puxado por uma corrente elétrica através de um gel no capilar, que é um tubo de vidro muito fino. Os fios de DNA emergem classificados por comprimento. À medida que emergem do capilar, passam por um laser que ativa os corantes que identificam as bases nucleotídicas. Esta informação é alimentada em um computador, que exibe a sequência de DNA na tela.