Co je to peptidový antigen?
Peptidový antigen je použití peptidu ke spuštění imunitního systému zvířete k vývoji protilátek k tomuto peptidu. Peptidy jsou krátké řetězce aminokyselin; delší řetězce jsou známé jako proteiny. Peptidový antigen může být použit jako součást vývoje vakcíny.
Peptidy jsou organické molekuly složené z dusíku, kyslíku, uhlíku, vodíku a obvykle síry. Jsou to řetězce aminokyselin a jsou spojeny peptidovou vazbou. Peptidové vazby jsou vazby skupin NH2 a COOH dvou sousedních aminokyselin.
Antigen je molekula, která se váže na protilátku a vytváří imunitní odpověď, reakce těla na molekuly, které se zdají být cizí. Ne všechny typy molekul jsou imunitním systémem rozpoznatelné. Proteiny, peptidy a řetězce cukrů mohou působit jako antigeny.
Existují také lidské antigeny. Patří sem proteiny, které jsou přítomny na povrchu nádorových buněk. Tyto antigeny mohou být také přítomny v krvi. Toto je základ pro testování na prostatický antigen, který se běžně používá ke screeningu rakoviny prostaty. Některé antigeny jsou záměrně zavedeny, aby působily jako vakcíny a vytvářely imunitní odpověď.
Protilátky jsou proteiny v krvi, které působí proti specifickému antigenu. Protilátka rozpoznává pouze některé části molekuly. Špička protilátky obsahuje paratop, který rozpoznává komplexní strukturu antigenu. Tato oblast protilátky je zodpovědná za velkou rozmanitost protilátek přítomných v organismu. Jeden jedinec může mít miliony různých protilátek.
Často se používají peptidové antigeny, protože jsou součástí většího proteinu, který nemusí být vyčištěn. Při použití peptidového antigenu k tvorbě protilátek je důležité, aby výzkumník používal antigenní část peptidu. Antigenoví specialisté mohou pomoci s návrhem antigenu maximalizovat šance, že peptid použitý jako antigen bude generovat protilátku. Je mnohem snazší předpovědět, které epitopy jsou vystaveny, pokud má někdo znalosti o trojrozměrné struktuře sloučeniny.
Ve většině případů není známa celková struktura peptidu, ačkoli prediktivní software může analyzovat, která část peptidu bude pravděpodobně antigenní. Peptidy, u nichž je největší pravděpodobnost, že se setkají s protilátkou, jsou peptidy na povrchu buňky. Pravděpodobně budou hydrofilní - rozpustné ve vodě. Flexibilita je také důležitým kritériem pro reakci peptidového antigenu s epitopem.
Jakmile byl identifikován vhodný peptidový antigen, vytvoří se syntetický peptid. Může být použit při imunizaci. Vstřikuje se do zvířete, aby se vytvořila imunitní odpověď. Jakmile byly protilátky izolovány, jsou analyzovány, aby se zajistilo, že organismus zavedl účinnou imunitní odpověď.
Jedním z běžných způsobů testování, zda jsou protilátky specifické pro požadovaný protein, je provedení westernového přenosu. To zahrnuje oddělení proteinů, které obsahují peptid na gelu, pomocí elektrického proudu. Tomu se říká elektroforéza. Pak jsou proteiny přeneseny na membránu a sondovány s protilátkou.
Pokud je pro protein specifická protilátka, bude se vázat na protein na membráně. Membrána je promyta a poté ošetřena sekundární protilátkou. Pokud by se například protilátky vyvíjely u myši, byla by sekundární protilátka anti-myší protilátka. Tato protilátka je zkonstruována tak, aby generovala barvu nebo luminiscenci, takže badatel může vidět, kde se původní protilátka vázala.