¿Cuál es la técnica de hibridación fluorescente in situ?
La hibridación fluorescente in situ, también conocida como hibridación in situ de fluorescencia, se conoce más comúnmente como peces. Es una técnica que implica el uso de un hilo corto de ADN marcado con un tinte fluorescente para detectar anormalidades genéticas. FISH permite a los investigadores visualizar cromosomas, partes de los cromosomas o genes específicos de manera rápida y precisa. Esto a menudo se usa para determinar el pronóstico y el tratamiento de ciertas enfermedades, particularmente los cánceres.
Se usa para determinar si los cromosomas tienen anormalidades. Esto puede incluir deleciones cromosómicas, reordenamientos o translocaciones, en las que dos cromosomas han cambiado de segmentos. FISH también permite a los investigadores visualizar genes específicos. Puede determinar si hay un determinado gen, donde se encuentra en los cromosomas, y si hay múltiples copias presentes. Esto se llama mapeo de genes.
La composición genética de una persona está contenida en su ADN, que se encuentra en los núcleos de todas sus células. El ADN tieneDos hilos que son complementarios entre sí. En otras palabras, tienen moléculas llamadas pares de bases que coinciden exactamente. Los genes son segmentos de ADN que tienen una secuencia particular de pares de bases y se encuentran en áreas específicas de cromosomas. Los genes se heredan y determinan cómo funcionan las células, pero también pueden mutarse si la secuencia de pares de bases de ADN cambia.
La técnica de hibridación fluorescente in situ aprovecha la naturaleza complementaria de los hilos de ADN. Los investigadores primero crean una sonda. Este es un pequeño hilo de ADN que es complementario a la secuencia genética que está buscando el investigador. La sonda luego se etiqueta o se une a un tinte fluorescente.
Las células del tejido enfermo, como una biopsia tumoral, generalmente conforman la muestra a examinar por los peces. La muestra se calienta para desnurar el ADN en los núcleos de las células. Esto significa queLos hilos dobles de ADN en las células de muestra se rompen para formar hilos únicos. Luego se hibrida una sonda de peces específica con la muestra. En otras palabras, se introduce la cadena única de la sonda y se fusiona con su hilo único complementario en las células de muestra desnaturalizadas.
Usando un microscopio fluorescente especial, el investigador mira la muestra. Si el gen o el cromosoma específico está presente en las células de muestra, aparecerá como una luz fluorescente contra un fondo más oscuro. Los investigadores pueden ver fácilmente si el gen está presente o no, y si es así, cuántas copias del gen hay en cada célula. Si el investigador está buscando la ubicación de un gen, él o ella puede ver dónde está en el cromosoma. Un microscopio de luz regular no se puede usar con peces, porque el tinte fluorescente emite un nivel de luz muy bajo.
El uso de la hibridación de ADN con sondas se realizó por primera vez en la década de 1960; Sin embargo, las sondas se etiquetaron con sustancias radiactivas en lugar de fluoresceNT los que. Esto tuvo varios problemas. Las sustancias radiactivas son inherentemente inestables, peligrosas y requieren protocolos especiales para la eliminación. También lleva mucho tiempo medir la señal radiactiva emitida por la sonda hibridada. La técnica de hibridación fluorescente in situ supera a la mayoría de estos obstáculos.
Si los investigadores saben qué gen están buscando, el pescado es rápido y preciso para encontrarlo. Los peces también se pueden realizar incluso si las células no se dividen activamente, y proporciona información más específica sobre anormalidades en los cromosomas. Las técnicas más convencionales, como el quarotipado, simplemente le dicen a los investigadores el número y el tamaño de los cromosomas dentro de una célula.
La hibridación in situ fluorescente tiene desventajas. Dado que la clave para el pescado es conocer la secuencia del par de bases y/o la ubicación de un gen, no puede usarse como una herramienta de detección general. También es más caro que otras técnicas menos específicas y puede no estar disponible en todos los laboratorios ohospitales.
Las ventajas y desventajas de la hibridación fluorescente in situ se describen mejor con el ejemplo. El pescado se usa rutinariamente en el diagnóstico de cáncer de mama para determinar si un paciente tiene múltiples copias de un gen llamado HER2. Esto generalmente indica una forma más agresiva de cáncer de mama, y que el paciente debe recibir ciertos medicamentos como parte de su tratamiento. El pez se puede usar para esto porque se conoce la secuencia del par de bases y la ubicación cromosómica del gen HER2. En contraste, los peces no pueden usarse para determinar qué gen o genes desconocidos han causado el cáncer de seno, o para detectar el cáncer de mama en general.