Qual é a técnica de hibridação fluorescente in situ?
A hibridação
fluorescente in situ, também conhecida como hibridização in situ de fluorescência in situ, é mais comumente chamada de peixe. É uma técnica que envolve o uso de uma fita curta de DNA marcada com um corante fluorescente para detectar anormalidades genéticas. O peixe permite que os investigadores visualizem cromossomos, partes de cromossomos ou genes específicos com rapidez e precisão. Isso é frequentemente usado para determinar o prognóstico e o tratamento de certas doenças, principalmente os cânceres.
Os peixes são usados para determinar se os cromossomos têm anormalidades. Isso pode incluir deleções cromossômicas, rearranjos ou translocações, nas quais dois cromossomos trocaram de segmentos. O peixe também permite que os pesquisadores visualizem genes específicos. Pode determinar se um determinado gene está presente, onde está localizado nos cromossomos e se várias cópias estão presentes. Isso é chamado de mapeamento de genes.
A composição genética de uma pessoa está contida em seu DNA, localizado nos núcleos de todas as suas células. DNA temDois fios complementares um ao outro. Em outras palavras, eles têm moléculas chamadas pares de bases que combinam exatamente. Os genes são segmentos de DNA que têm uma sequência específica de pares de bases e estão localizados em áreas específicas de cromossomos. Os genes são herdados e determinam como as células funcionam, mas também podem ser mutadas se a sequência de pares de bases de DNA mudar.
A técnica de hibridação fluorescente in situ tira proveito da natureza complementar dos fios de DNA. Os investigadores criam primeiro uma investigação. Esta é uma fita curta e única de DNA que é complementar à sequência genética que o investigador está procurando. A sonda é então rotulada ou anexada a um corante fluorescente.
As célulasdo tecido doente, como uma biópsia tumoral, geralmente compõem a amostra a ser examinada por peixes. A amostra é aquecida para desnaturar o DNA nos núcleos das células. Isso significa issoOs fios duplos de DNA nas células da amostra se separam para formar fios únicos. Uma sonda de peixe específica é então hibridada com a amostra. Em outras palavras, a fita única da sonda é introduzida e fusíveis com sua fita única complementar nas células de amostra desnaturadas.
Usando um microscópio fluorescente especial, o pesquisador analisa a amostra. Se o gene ou cromossomo específico estiver presente nas células da amostra, ele aparecerá como uma luz fluorescente contra um fundo mais escuro. Os pesquisadores podem ver facilmente se o gene está presente ou não, e se for, quantas cópias do gene estão em cada célula. Se o pesquisador estiver procurando a localização de um gene, ele pode ver onde está no cromossomo. Um microscópio de luz regular não pode ser usado com peixe, porque o corante fluorescente emite um nível muito baixo de luz.
O uso da hibridação do DNA com sondas foi realizado pela primeira vez na década de 1960; No entanto, as sondas foram rotuladas com substâncias radioativas em vez de fluorescent. Isso teve vários problemas. As substâncias radioativas são inerentemente instáveis, perigosas e requerem protocolos especiais para descarte. Também leva muito tempo para medir o sinal radioativo emitido pela sonda hibridada. A técnica de hibridação fluorescente in situ supera a maioria desses obstáculos.Se os investigadores souberem que gene estão procurando, o peixe é rápido e preciso para encontrá -lo. Os peixes também podem ser realizados mesmo que as células não estejam se dividindo ativamente e fornecem informações mais específicas sobre anormalidades nos cromossomos. Técnicas mais convencionais, como a karotipagem, simplesmente dizem aos investigadores o número e o tamanho dos cromossomos dentro de uma célula.
A hibridação fluorescente in situ tem desvantagens. Como a chave para o peixe é conhecer a sequência de pares de bases e/ou localização de um gene, ela não pode ser usada como uma ferramenta de triagem geral. Também é mais caro que outras técnicas menos específicas e pode não estar disponível em todos os laboratórios ouhospitais.
As vantagens e desvantagens da hibridação fluorescente in situ são melhor descritas pelo exemplo. Os peixes são usados rotineiramente no diagnóstico de câncer de mama para determinar se um paciente tem várias cópias de um gene chamado HER2. Isso geralmente indica uma forma mais agressiva de câncer de mama e que o paciente deve receber certos medicamentos como parte de seu tratamento. Os peixes podem ser usados para isso porque a sequência de pares de bases e a localização cromossômica do gene HER2 são conhecidos. Por outro lado, os peixes não podem ser usados para determinar o que o gene ou genes desconhecidos causou o câncer de mama ou para rastrear o câncer de mama em geral.