¿Qué es la electroforesis en gel 2D?
La electroforesis en gel bidimensional (2D) es un método que los científicos usan para desmontar y analizar mezclas de proteínas al separar primero bandas de proteínas a lo largo de dos ejes diferentes. Es una técnica que se usa con mayor frecuencia cuando se trata de mezclas complicadas o gruesas de proteínas, a menudo con tamaños superpuestos de proteínas. La electroforesis en gel 2D difiere de la electroforesis en gel unidimensional porque el método anterior emplea la separación de proteínas basadas en dos características de proteínas diferentes, mientras que Carga eléctrica. Este hecho se puede utilizar a la ventaja de los científicos porque las moléculas cargadas se pueden separar por tamaño a través de un sustrato poroso como agarosa aplicando un gradiente de voltaje a través de un gel iónico poroso. EncimaTiempo, las moléculas pasarán a través de este gel, hacia la carga opuesta a la carga natural de la molécula. Las moléculas pequeñas y las moléculas muy cargadas se mueven más rápido que las moléculas o proteínas grandes que están débilmente cargadas. En la electroforesis en gel 2D, después de separar las proteínas a través de una sola característica, que crea un gradiente, se puede girar un gel de lado para separar esas bandas previamente resultantes basadas en una segunda característica.
La electroforesis en gel 2D a menudo emplea cargas moleculares de proteínas como una característica por la cual los agregados de proteínas pueden separarse en proteínas de un solo componente. La masa de proteína es otra característica común utilizada para separar proteínas en la electroforesis en gel 2D. Después de que las proteínas se ejecutan en un gel a través de un solo carril en electroforesis en gel unidimensional, ese gel se puede girar en una centrífuga, reduciendo las proteínas más pesadas rápidamenteER que las proteínas más pequeñas y menos masivas. La dirección del tirón es perpendicular a la dirección en que las proteínas se dibujaron a través del gel debido a la atracción por una carga eléctrica a través de un gradiente de voltaje.
La electroforesis tiene muchos usos en estudios moleculares, incluida la separación de proteínas basadas en características sintetizadas, como el etiquetado de proteínas. La separación de proteínas basada en una masa característica también se usa cuando las proteínas se etiquetan con otras moléculas. Esta técnica se puede usar con estos complejos de proteínas porque las proteínas marcadas caerán más fácilmente a través de un gel que proteínas sin etiquetar.
Si bien muchos geles de separación en laboratorios están hechos de agarosa, la separación de proteínas por electroforesis en gel 2D se realiza mejor en los geles de poliacrilamida. Estos tipos de geles se usan en transferencias occidentales y otros ensayos basados en el tamaño de la proteína. La agarosa se usa con mayor frecuencia para la separación de segmentos de ADN.