O que é eletroforese em gel 2D?

A eletroforese em gel bidimensional (2D) é um método que os cientistas usam para desmontar e analisar misturas de proteínas, separando as primeiras faixas de proteínas ao longo de dois eixos diferentes. É uma técnica que é mais frequentemente usada ao lidar com misturas complicadas ou grossas de proteínas, geralmente com tamanhos sobrepostos de proteínas. A eletroforese em gel 2D difere da eletroforese em gel unidimensional porque o método anterior emprega a separação de proteínas com base em duas características de proteínas diferentes, enquanto a eletroforese de gel unidimensional geralmente separa proteínas com base em uma única característica, como o tamanho da proteína. carga elétrica. Esse fato pode ser usado para a vantagem dos cientistas, porque as moléculas carregadas podem ser separadas por tamanho através de um substrato poroso como a agarose aplicando um gradiente de tensão em um gel iônico poroso. SobreTempo, as moléculas passarão por esse gel, em direção à carga que é oposta à carga natural da molécula. Moléculas pequenas e moléculas fortemente carregadas se movem mais rápido que moléculas grandes ou proteínas que são fracamente carregadas. Na eletroforese em gel 2D, após separar as proteínas através de uma única característica, que cria um gradiente, um gel pode ser transformado de lado para separar as bandas anteriormente resultantes baseadas em uma segunda característica.

A eletroforese em gel 2D geralmente emprega cargas moleculares de proteínas como uma característica pela qual os agregados de proteínas podem ser separados em proteínas de componentes únicos. A massa proteica é outra característica comum usada para separar proteínas na eletroforese em gel 2D. Depois que as proteínas são executadas em um gel através de uma única faixa em eletroforese em gel unidimensional, esse gel pode ser girado em uma centrífuga, puxando as proteínas mais pesadas para baixoque as proteínas menores e menos maciças. A direção da atração é perpendicular à direção em que as proteínas foram desenhadas através do gel devido à atração a uma carga elétrica através de um gradiente de tensão.

A eletroforese

possui muitos usos em estudos moleculares, incluindo a separação de proteínas com base em características sintetizadas, como marcação de proteínas. A separação de proteínas com base em uma massa característica também é usada quando as proteínas são marcadas com outras moléculas. Essa técnica pode ser usada com esses complexos de proteínas, porque as proteínas marcadas cairão mais prontamente através de um gel do que as proteínas não marcadas.

Enquanto muitos géis de separação em laboratórios são feitos de agarose, a separação de proteínas por eletroforese em gel 2D é melhor feita em géis de poliacrilamida. Esses tipos de géis são usados ​​em Western blots e outros ensaios baseados em tamanho de proteína. Agarose é mais frequentemente usada para a separação de segmentos de DNA.