Hvad er 2D gelelektroforese?

To-dimensionel (2D) gelelektroforese er en metode, som forskere bruger til at adskille og analysere proteinblandinger ved først at adskille proteiner bånd langs to forskellige akser. Det er en teknik, der oftest bruges, når man håndterer komplicerede eller tykke blandinger af proteiner, ofte med overlappende størrelser af proteiner. 2D gel electrophoresis differs from one-dimensional gel electrophoresis because the former method employs separation of proteins based on two different protein characteristics, whereas one-dimensional gel electrophoresis usually separates proteins based on a single characteristic, like protein size.

Gel electrophoresis is often used in research to separate molecules by making use of the fact that many biological Molekyler har som DNA en elektrisk ladning. Denne kendsgerning kan bruges til fordel for forskere, fordi ladede molekyler kan adskilles efter størrelse gennem et porøst substrat som agarose ved at påføre en spændingsgradient på tværs af en porøs, ionisk gel. OverTid, molekyler vil passere gennem denne gel mod den ladning, der er modsat den naturlige ladning af molekylet. Små molekyler og stærkt ladede molekyler bevæger sig begge hurtigere end store molekyler eller proteiner, der er svagt ladede. I 2D gelelektroforese, efter at have adskilt proteiner gennem en enkelt egenskab, der skaber en gradient, kan en gel derefter drejes sidelæns for at adskille de tidligere resulterende bånd baseret på en anden egenskab.

2D -gelelektroforese anvender ofte molekylære ladninger af proteiner som en egenskab, hvormed proteinaggregater kan opdeles i enkeltkomponentproteiner. Proteinmasse er en anden almindelig egenskab, der bruges til at adskille proteiner i 2D gelelektroforese. Efter at proteiner køres på en gel gennem en enkelt bane i en-dimensionel gelelektroforese, kan den gel derefter blive spundet i en centrifuge, der trækker de tungere proteiner hurtigt neder end de mindre, mindre massive proteiner. Trækretningen er vinkelret på den retning, som proteinerne blev trukket gennem gelen på grund af tiltrækning til en elektrisk ladning gennem en spændingsgradient.

Elektroforese har mange anvendelser i molekylære undersøgelser, herunder adskillelse af proteiner baseret på syntetiserede egenskaber, som proteinmærkning. Proteinseparation baseret på en karakteristisk masse bruges også, når proteiner er mærket med andre molekyler. Denne teknik kan bruges med disse proteinkomplekser, fordi de mærkede proteiner falder lettere gennem en gel end ikke -mærgede proteiner.

Mens mange separationsgeler i laboratorier er lavet af agarose, udføres proteinseparation med 2D gelelektroforese bedst på polyacrylamidgeler. Disse typer geler bruges i vestlige blots og andre proteinstørrelsesbaserede assays. Agarose bruges oftere til adskillelse af DNA -segmenter.