Qual é o objetivo da remoção de endotoxina?
endotoxina é um contaminante comum de produtos médicos que derivam de bactérias. A presença de endotoxina pode vir de componentes intrínsecos do processo de fabricação ou da contaminação acidental do produto. A endotoxina pode causar choque endotóxico - ou séptico, lesão tecidual e até morte. A remoção da endotoxina antes de aprovar o medicamento para liberação é, portanto, necessária para evitar causar doenças no destinatário de um medicamento.
A contaminação por endotoxina ocorre quando um certo grupo de bactérias, chamadas bactérias gram -negativas, estão presentes ou estão presentes no processo de fabricação. Com as bactérias geralmente divididas em dois grupos, as bactérias gram -negativas e grama positivas, são extremamente comuns. A designação Gram -negativa deriva da aparência das bactérias após um processo de coloração específico, chamado de mancha de grama, foi realizado. A endotoxina está presente em todas as bactérias gram -negativas, independentemente de causar doenças.A parte de uma bactéria Gram negativa contém lipopolissacarídeos (LPS) usados para estabilidade estrutural. A endotoxina refere -se a essa parte do LPS da bactéria. Por exemplo, uma célula de E. coli contém cerca de 2 milhões de moléculas de LPS. O LPS não está apenas presente nas células das bactérias vivas ou mortas, mas também são liberadas continuamente no ambiente. A liberação acontece durante o crescimento e a divisão da bactéria e quando a célula morre.
A molécula LPS tem um efeito indiretamente deletério no corpo. A endotoxina interage com o sistema imunológico através da ligação com as células no sangue chamado macrófagos e monócitos. Essa ligação causa uma resposta inflamatória, liberando fatores como interleucina-6, interleucina-1 e fator de necrose tumoral. Essa resposta inflamatória leva à febre e, às vezes, choque endotóxico e morte.
Esses efeitos perigosos ocorrem com um único hDose IGH de endotoxina ou com níveis mais baixos de exposição repetidos. Uma dose de 1 nanograma de LPS por mililitro de produto pode invocar uma reação endotóxica em mamíferos quando o produto é injetado por via intravenosa. Pessoas com doenças como AIDS, leucemia ou diabetes estão especialmente em risco de choque endotóxico.
Bactérias gram -negativas geneticamente modificadas são usadas regularmente na produção de proteínas e peptídeos biologicamente ativos. A presença das moléculas de LPS nas células produtoras e na cultura circundante significa que o produto requer purificação e remoção de endotoxina. O lipopolissacarídeo é uma molécula muito estável em comparação com as proteínas, resistindo ao pH e temperaturas extremas, de modo que a remoção de endotoxina requer técnicas de remoção complexas. Os fabricantes, portanto, usam métodos como cromatografia de troca de íons, ultrafiltração e cromatografia baseada em membrana para remoção ou redução de endotoxina para um nível aceitável.