Hvad er et genbibliotek?
Et genbibliotek er udtrykket for samlinger af deoxyribonukleinsyre (DNA) fragmenter, der er klonet tilfældigt fra organismernes genomer. De klones som plasmider, som kan replikere separat fra deres kromosomer og fager, som er en parasitvirus, der lever af bakterier. Når klonet som plasmider er samlingen af værtsceller, og hver af cellerne indeholder et DNA-fragment. Faggenbiblioteker består af hvad der kaldes faglysater, som er rester af ødelagte celler med et DNA-fragment indsat. Når genbiblioteker indeholder en samling af al den genetiske information om en organisme, betragtes de som et repræsentativt genbibliotek.
Derudover kan biblioteker bruge cellulær rekombinant nukleinsyre (RNA) til opbrydning af materiale, og denne samling af værtsceller med de rekombinante vektorer er kendt som et cRNA-genbibliotek. Genbibliotekscreening finder bestemte celler, der indeholder kloningsvektorer, hvor der søges et bestemt gen i et genbibliotek og bruger derefter en af mange teknikker til isolering og høst af dem. Når cellerne er høstet, betragtes de som klonede. For at have en rimelig chance for at isolere og klone et specifikt gen anvendes normalt kun repræsentative genbiblioteker som hvert gen, og hvert oprindeligt DNA-fragment af et bestemt genom opsamles deri. For at nå en 99% chance for at lokalisere et bestemt humant gen til kloning, skulle mere end 600.000 klonede celler screenes for at finde det ønskede gen fra et repræsentativt genbibliotek.
DNA ekstraheres fra en organisme for at starte et genbibliotek. Biblioteket er struktureret til at organisere DNA'et og dets tusinder af forskellige gener. Biblioteket bliver en samling af titusinder af bakteriekolonier, hver moduleret med et fragment af DNA fra organismen, der indeholder et gen af særlig interesse. Biblioteker indeholder også restriktionsenzymer og et plasmid. Restriktionsenzymerne bruges til at læse nukleotidinformationen til DNA'et og bruges til at skære DNA'et i fragmenter ved at adskille nukleotiderne fra hinanden.
De samme restriktionsenzymer skærer bakterieplasmiderne, og fragmenterne og plasmiderne kombineres i et reagensglas for at kombinere, hvilket giver en ny kombination. Disse rekombinante plasmider returneres derefter tilbage til bakteriekultur ved anvendelse af enten varmechock eller elektroporering. Disse trin udføres igen og igen, indtil der er dannet et helt genbibliotek til en bestemt genomorganisme fra alle fragmenterne af den originale DNA-ekstraktion.