O que é uma biblioteca de genes?
Uma biblioteca genética é o termo para coleções de fragmentos de ácido desoxirribonucleico (DNA) que foram clonados aleatoriamente dos genomas dos organismos. Eles são clonados como plasmídeos que podem se replicar separadamente de seus cromossomos e fagos, que são um vírus parasitário que se alimenta de bactérias. Quando clonado como plasmídeos, a coleção é de células hospedeiras e cada uma das células contém um fragmento de DNA. As bibliotecas de genes de fagos são compostos pelo que é chamado de lisados de fagos, que são resíduos de células destruídas com um fragmento de DNA inserido. Quando as bibliotecas de genes contêm uma coleção de todas as informações genéticas sobre um organismo, elas são consideradas uma biblioteca de genes representacional.
Além disso, as bibliotecas podem usar o ácido nucleico recombinante celular (RNA) para o material de atracação, e essa coleção de células hospedeiras com os vetores recombinantes é conhecida como uma biblioteca de crna. A triagem da biblioteca de genes encontra células específicas contendo vetores de clonagem com um gene específico sendo procurado em um gene LibrAry e, em seguida, usa uma das muitas técnicas de isolá -las e colhê -las. Uma vez colhidos, as células são consideradas clonadas. Para ter uma chance razoável de isolar e clonar um gene específico, geralmente apenas as bibliotecas de genes representacionais são usadas como todo gene e todo fragmento de DNA original de um genoma específico é coletado nele. Para atingir uma chance de 99% de localizar um gene humano específico para a clonagem, mais de 600.000 células clonadas precisariam ser rastreadas para encontrar o gene desejado de uma biblioteca de genes representacional.
O DNA é extraído de um organismo para iniciar uma biblioteca de genes. A biblioteca está estruturada para organizar o DNA e seus milhares de genes diferentes. A biblioteca se torna uma coleção de dezenas de milhares de colônias de bactérias, cada uma modulada com um fragmento de DNA do organismo que contém um gene de interesse especial. Bibliotecas também contêm enzimas de restriçãoe um plasmídeo. As enzimas de restrição são usadas para ler as informações de nucleotídeos do DNA e são usadas para cortar o DNA em fragmentos, separando os nucleotídeos um do outro.
As mesmas enzimas de restrição cortam os plasmídeos bacterianos e os fragmentos e plasmídeos são combinados em um tubo de ensaio para combinar, fazendo uma nova combinação. Esses plasmídeos recombinantes são então devolvidos de volta à cultura de bactérias usando choque térmico ou eletroporação. Essas etapas são executadas repetidamente até que uma biblioteca gene inteira tenha sido formada para um organismo de genoma específico de todos os fragmentos da extração original de DNA.