O que é fluorescência quantitativa?
A fluorescência quantitativa é a exibição de radiação emitida em uma amostra. Usando a tecnologia de imagem, um cientista pode coletar informações sobre a amostra e usá-la para aprender mais sobre sua estrutura ou função. Essa abordagem é comumente usada em biologia para estudar células individuais e organismos inteiros. Requer acesso a um laboratório que contém equipamentos de microscopia e câmeras com sensibilidade apropriada. Exemplos de imagens dessa forma de análise podem ser vistos em livros e artigos científicos, além de discussões sobre os dados obtidos.
As amostras preparadas para a imagem microscópica podem ser coradas com etiquetas fluorescentes, como proteínas que se ligam a estruturas específicas da célula. Quando essas tags são visualizadas através de uma câmera nas condições corretas, elas acendem. Simplesmente observar a iluminação pode fornecer informações importantes para o pesquisador. Por exemplo, um imunologista que procura vestígios de um anticorpo específico pode usar uma etiqueta para identificá-lo. Este é um exemplo de fluorescência qualitativa, em que a iluminação fornece informações gerais sobre as qualidades da amostra.
Nas medições da fluorescência quantitativa, o pesquisador coleta informações específicas e mensuráveis. Isso pode incluir dados sobre a intensidade precisa da luz. Um tratamento mais aprofundado da amostra pode oferecer oportunidades para técnicas avançadas de imagem, como a Recuperação Fluorescente Após Fotobranqueamento (FRAP), que fornece informações sobre o movimento de estruturas dentro das amostras. Todas essas técnicas quantitativas de fluorescência podem oferecer uma nova visão sobre o que é uma estrutura, como ela funciona e o que ela contém.
Equipamento de precisão é necessário para este tipo de trabalho. Quaisquer tratamentos fluorescentes adicionados a uma amostra precisam ser cuidadosamente preparados para marcar as estruturas desejadas e nada mais. O equipamento precisa ser adequadamente sensível e calibrado para confirmar que está coletando informações precisas. Se o detector em uma câmera digital estiver desligado, por exemplo, ele pode falhar na coleta de fluorescência em algumas partes da amostra ou gerar uma leitura falsa. Nos dois casos, os dados estariam incorretos.
Os laboratórios de patologia podem usar fluorescência quantitativa para a avaliação de algumas amostras. Essa técnica também é amplamente utilizada em pesquisas. Algumas imagens muito impressionantes podem ser desenvolvidas com a ajuda de etiquetas fluorescentes para separar estruturas como nervos ou proteínas específicas. Além de serem visualmente notáveis, as imagens podem conter uma riqueza de informações para pesquisadores com a capacidade de lê-las. É possível analisar imagens quantitativas de fluorescência com programas de computador avançados para extrair mais dados e gerar resultados significativos.