Co je kvantitativní fluorescence?
Kvantitativní fluorescence je výstavba záření emitovaného ve vzorku. Pomocí zobrazovací technologie může vědec shromažďovat informace o vzorku a používat jej k získání více informací o jeho struktuře nebo funkci. Tento přístup se v biologii běžně používá ke studiu jednotlivých buněk a celých organismů. Vyžaduje přístup do laboratoře, která obsahuje mikroskopické vybavení a kamery vhodné citlivosti. Příklady obrázků z této formy analýzy lze vidět v učebnicích a vědeckých článcích spolu s diskusemi o získaných datech.
Vzorky připravené pro mikroskopické zobrazování mohou být obarveny fluorescenčními značkami, jako jsou proteiny, které se váží na specifické struktury v buňce. Pokud jsou tyto značky prohlíženy kamerou ve správných podmínkách, rozsvítí se. Pouhé pozorování osvětlení může vědci poskytnout důležité informace. Imunolog, který hledá stopy specifické protilátky, může například použít značku k jeho identifikaci. Toto je příklad kvalitativní fluorescence, kde osvětlení poskytuje obecné informace o vlastnostech vzorku.
Při měření kvantitativní fluorescence shromažďuje badatel specifické, měřitelné informace. To by mohlo zahrnovat údaje o přesné intenzitě světla. Další ošetření vzorku může nabídnout příležitosti pro pokročilé zobrazovací techniky, jako je fluorescenční zotavení po fotobělení (FRAP), které poskytuje informace o pohybu struktur uvnitř vzorků. Všechny tyto kvantitativní fluorescenční techniky mohou poskytnout nový pohled na to, co je struktura, jak funguje a co obsahuje.
Pro tento druh práce je vyžadováno přesné vybavení. Jakákoli fluorescenční ošetření přidaná do vzorku musí být pečlivě připravena, aby označovaly požadované struktury a nic jiného. Zařízení musí být náležitě citlivé a kalibrované, aby se potvrdilo, že shromažďuje přesné informace. Pokud je například detektor v digitálním fotoaparátu vypnutý, může selhat při shromažďování fluorescence v některých částech vzorku nebo může způsobit nesprávné čtení. V obou případech by údaje byly nesprávné.
Patologické laboratoře mohou pro hodnocení některých vzorků použít kvantitativní fluorescenci. Tato technika je také široce používána ve výzkumu. Některé velmi nápadné obrazy lze vytvořit pomocí fluorescenčních značek k oddělení struktur, jako jsou nervy nebo specifické proteiny. Kromě toho, že jsou vizuálně pozoruhodné, mohou obrázky obsahovat velké množství informací pro vědce s možností jejich čtení. Je možné analyzovat kvantitativní obrazy fluorescence pomocí pokročilých počítačových programů, aby bylo možné extrahovat více dat a generovat smysluplné výsledky.