Wat is kwantitatieve fluorescentie?
Kwantitatieve fluorescentie is de tentoonstelling van straling die in een monster wordt uitgezonden. Met behulp van beeldverwerkingstechnologie kan een wetenschapper informatie over het specimen verzamelen en gebruiken om meer te weten te komen over de structuur of functie. Deze benadering wordt vaak in de biologie gebruikt om individuele cellen en hele organismen te bestuderen. Het vereist toegang tot een laboratorium met microscopie-apparatuur en camera's met de juiste gevoeligheid. Voorbeelden van afbeeldingen uit deze vorm van analyse zijn te zien in studieboeken en wetenschappelijke artikelen, samen met discussies over de verkregen gegevens.
Specimens die zijn voorbereid voor microscoopbeeldvorming kunnen worden gekleurd met fluorescerende tags, zoals eiwitten die zich hechten aan specifieke structuren in de cel. Wanneer deze tags in de juiste omstandigheden door een camera worden bekeken, lichten ze op. Het eenvoudig observeren van de verlichting kan belangrijke informatie voor de onderzoeker opleveren. Een immunoloog die bijvoorbeeld sporen van een specifiek antilichaam zoekt, kan een tag gebruiken om het te identificeren. Dit is een voorbeeld van kwalitatieve fluorescentie, waarbij de verlichting algemene informatie geeft over de kwaliteiten van het monster.
Bij metingen van kwantitatieve fluorescentie verzamelt de onderzoeker specifieke, meetbare informatie. Dit kan gegevens bevatten over de precieze intensiteit van het licht. Verdere behandeling van het specimen kan kansen bieden voor geavanceerde beeldvormingstechnieken zoals Fluorescent Recovery After Photobleaching (FRAP), dat informatie geeft over de beweging van structuren binnen specimens. Al deze kwantitatieve fluorescentietechnieken kunnen nieuw inzicht bieden in wat een structuur is, hoe deze functioneert en wat deze bevat.
Voor dit soort werkzaamheden is precisieapparatuur vereist. Alle fluorescerende behandelingen die aan een monster worden toegevoegd, moeten zorgvuldig worden voorbereid, zodat ze de gewenste structuren markeren en niets anders. De apparatuur moet voldoende gevoelig zijn en worden gekalibreerd om te bevestigen dat het nauwkeurige informatie oppikt. Als de detector in een digitale camera bijvoorbeeld is uitgeschakeld, kan deze in sommige delen van het monster geen fluorescentie verzamelen of een valse waarde genereren. In beide gevallen zouden de gegevens onjuist zijn.
Pathologielabs kunnen kwantitatieve fluorescentie gebruiken voor de evaluatie van sommige specimens. Deze techniek wordt ook veel gebruikt in onderzoek. Sommige zeer opvallende afbeeldingen kunnen worden ontwikkeld met behulp van fluorescerende tags om structuren zoals zenuwen of specifieke eiwitten te scheiden. De afbeeldingen zijn niet alleen visueel opmerkelijk, maar kunnen ook een schat aan informatie bevatten voor onderzoekers die ze kunnen lezen. Het is mogelijk om kwantitatieve fluorescentiebeelden te analyseren met geavanceerde computerprogramma's om meer gegevens te extraheren en betekenisvolle resultaten te genereren.