¿Qué es el polimorfismo de longitud del fragmento de restricción?
Un polimorfismo de longitud de fragmento de restricción, o RFLP, es una variación en secuencias de ADN homólogas. Los polimorfismos son las variaciones en el ADN homólogo que ocurren entre individuos, mientras que el término restricción se refiere al hecho de que pequeñas secciones de ADN pueden cortarse de una pieza grande usando enzimas de restricción. Algunas secciones de ADN tienen más variabilidad que otras, y las secciones con un alto grado de variabilidad son útiles en el análisis de polimorfismo de longitud de fragmento de restricción.
El polimorfismo de la longitud del fragmento de restricción depende de la actividad de las endonucleasas de restricción. Esta clase de enzima se encuentra en muchas especies bacterianas. En una bacteria, el papel de las endonucleasas de restricción es proporcionar protección contra el ADN extraño que obtiene acceso, rompiéndolo en pedazos. En la investigación molecular, las enzimas de restricción pueden usarse para fragmentar el ADN en sitios conocidos de variabilidad para que los fragmentos resultantes puedan ser analizados.
Cada tipo de enzima reconoce una secuencia específica de pares de bases de ADN y actúa para escindir la molécula de ADN en cualquier punto donde reconoce la secuencia. Las bacterias protegen su propio ADN de la ruptura con un patrón distintivo de metilación del ADN que evita que las endonucleasas de restricción se unan. Se han descubierto más de 800 endonucleasas de restricción diferentes, que juntas reconocen más de 100 secuencias de nucleótidos únicas. Las secuencias más reconocidas tienen entre cuatro y seis pares de bases de longitud.
Las enzimas de restricción se usan en biotecnología para analizar el polimorfismo de longitud de fragmento de restricción por una variedad de razones. Las enzimas se usan para cortar longitudes de ADN en ciertas secuencias para poder examinar las diferencias entre los individuos. Las soluciones de ADN fragmentado, cortadas en ciertas secuencias de nucleótidos conocidas, se hibridan con sondas diseñadas para detectar secuencias de ADN predefinidas. Las muestras se analizan luego usando electroforesis en gel. Esta técnica produce un gel con múltiples bandas de tinción oscura, cada una de las cuales representa un fragmento de ADN diferente. Al examinar el patrón de tinción, los científicos pueden determinar el patrón de RFLP presentes en una muestra.
Los polimorfismos ocurren ampliamente en todo el genoma humano, y el análisis de estos ha demostrado que diferentes grupos de personas tienden a compartir RFLP en común. Ciertos tipos de RFLP son comunes a personas de diferentes grupos étnicos u orígenes geográficos, por ejemplo, y el vínculo también existe dentro de los grupos familiares. Esta variación existe en todo el reino animal, por lo que es una herramienta de investigación útil no solo para rastrear la ascendencia humana, sino también para estudiar la migración y evolución de la vida silvestre.
El análisis de los polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción puede proporcionar información útil para fines clínicos y médicos. Las sondas de polimorfismo de longitud de fragmento de restricción se utilizan en pruebas de paternidad, en el diagnóstico de enfermedades hereditarias, en la ciencia forense y en el genotipado. El análisis de los patrones de RFLP en todo un genoma es la base de las huellas dactilares de ADN, la técnica que es la base de todos estos diferentes usos.