Hvad er begrænsningsfragmentlængde polymorfisme?
En restriktionsfragmentlængde polymorfisme eller RFLP er en variation i homologe DNA -sekvenser. Polymorfismer er variationerne i homologt DNA, der forekommer mellem individer, mens udtrykket begrænsning henviser til det faktum, at små sektioner af DNA kan skæres fra et stort stykke ved hjælp af begrænsningsenzymer. Nogle DNA -sektioner har mere variation end andre, og sektioner med en høj grad af variation er nyttige i restriktionsfragmentlængde polymorfismeanalyse.
restriktionsfragmentlængde polymorfisme er afhængig af aktiviteten af begrænsningsendonukleaser. Denne klasse af enzym findes i mange bakteriearter. I en bakterie er rollen som begrænsningsendonukleaser at give beskyttelse mod udenlandsk DNA, der får adgang ved at opdele det i stykker. I molekylær forskning kan restriktionsenzymer bruges til at fragmentere DNA på kendte variationsteder, så de resulterende fragmenter kan analyseres.
Hver type enzym genkender en specifik DNA -base PAIr -sekvens og virker til at spaltning af DNA -molekylet på ethvert tidspunkt, hvor det genkender sekvensen. Bakterier beskytter deres eget DNA mod at blive brudt med et karakteristisk mønster af DNA -methylering, der forhindrer, at begrænsningsendonukleaser er i binding. Mere end 800 forskellige begrænsningsendonukleaser er blevet opdaget, som tilsammen genkender mere end 100 unikke nukleotidsekvenser. De fleste anerkendte sekvenser er mellem fire og seks basepar i længden.
Begrænsningsenzymer anvendes i bioteknologi til at analysere begrænsning af fragmentlængde polymorfisme af forskellige årsager. Enzymerne bruges til at skære DNA -længder ved visse sekvenser, så forskellene mellem individer kan undersøges. Opløsninger af fragmenteret DNA, skåret ved visse kendte nukleotidsekvenser, hybridiseres med prober designet til at detektere foruddefinerede DNA-sekvenser. Prøverne analyseres derefter ved anvendelse af gelelektroforese.Denne teknik producerer en gel med flere bånd af mørk farvning, som hver repræsenterer et andet DNA -fragment. Ved at undersøge farvningsmønsteret kan forskere bestemme mønsteret for RFLP'er, der er til stede i en prøve.
Polymorfismer forekommer vidt gennem det humane genom, og analyse af disse har vist sig, at forskellige grupper af mennesker har en tendens til at dele RFLP'er til fælles. Visse RFLP -typer er for eksempel almindelige for mennesker i forskellige etniske grupper eller geografisk oprindelse, og sammenhæng findes også inden for familiegrupper. Denne variation findes i hele dyreriget, hvilket gør det til et nyttigt forskningsværktøj ikke kun til at spore menneskelig aner, men også til at studere migration og udvikling af dyreliv og evolution.
Analyse af begrænsningsfragmentlængde polymorfismer kan give nyttig information til kliniske og medicinske formål. Restriktionsfragmentlængde polymorfismeprober anvendes i faderskabstest, i diagnose af arvelige sygdomme, i retsmedicinsk videnskab og i genotyping. AnaLyzing mønstre af RFLP'er på tværs af et helt genom er grundlaget for DNA -fingeraftryk, teknikken, der er understøttelsen af alle disse forskellige anvendelser.