O que é polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição?
Um polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição, ou RFLP, é uma variação nas sequências de DNA homólogas. Polimorfismos são as variações no DNA homólogo que ocorrem entre indivíduos, enquanto o termo restrição se refere ao fato de que pequenas seções de DNA podem ser cortadas de um pedaço grande usando enzimas de restrição. Algumas seções de DNA têm mais variabilidade do que outras, e seções com um alto grau de variabilidade são úteis na análise de polimorfismos de comprimento de fragmentos de restrição.
O polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição depende da atividade das endonucleases de restrição. Esta classe de enzima é encontrada em muitas espécies bacterianas. Em uma bactéria, o papel das endonucleases de restrição é fornecer proteção contra DNA estranho que tenha acesso, quebrando-o em pedaços. Na pesquisa molecular, as enzimas de restrição podem ser usadas para fragmentar o DNA em locais conhecidos de variabilidade, para que os fragmentos resultantes possam ser analisados.
Cada tipo de enzima reconhece uma sequência específica de pares de bases de DNA e atua para clivar a molécula de DNA em qualquer ponto em que reconheça a sequência. As bactérias protegem seu próprio DNA de serem quebradas com um padrão distinto de metilação do DNA que impede a ligação de endonucleases de restrição. Foram descobertas mais de 800 endonucleases de restrição diferentes, que juntas reconhecem mais de 100 sequências nucleotídicas únicas. As sequências mais reconhecidas têm entre quatro e seis pares de bases.
As enzimas de restrição são usadas na biotecnologia para analisar o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição por várias razões. As enzimas são usadas para cortar comprimentos de DNA em certas seqüências, para que as diferenças entre os indivíduos possam ser examinadas. As soluções de DNA fragmentado, cortadas em certas seqüências nucleotídicas conhecidas, são hibridadas com sondas projetadas para detectar sequências de DNA predefinidas. As amostras são então analisadas usando eletroforese em gel. Essa técnica produz um gel com várias bandas de coloração escura, cada uma representando um fragmento de DNA diferente. Examinando o padrão de coloração, os cientistas podem determinar o padrão de RFLPs presentes em uma amostra.
Os polimorfismos ocorrem amplamente em todo o genoma humano, e a análise destes provou que diferentes grupos de pessoas tendem a compartilhar RFLPs em comum. Certos tipos de RFLP são comuns a pessoas de diferentes grupos étnicos ou origens geográficas, por exemplo, e a ligação também existe dentro de grupos familiares. Essa variação existe em todo o reino animal, tornando-a uma ferramenta de pesquisa útil não apenas para rastrear a ancestralidade humana, mas também para estudar a migração e a evolução da vida selvagem.
A análise dos polimorfismos do comprimento do fragmento de restrição pode fornecer informações úteis para fins clínicos e médicos. As sondas de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição são usadas em testes de paternidade, no diagnóstico de doenças hereditárias, na ciência forense e na genotipagem. A análise de padrões de RFLPs em todo um genoma é a base da impressão digital do DNA, a técnica que está na base de todos esses diferentes usos.