Wat is een confocale microscoop?
Een confocale microscoop is een bepaald soort fluorescerende microscoop die wordt gebruikt om hoogwaardige 2D- en 3D-afbeeldingen te verkrijgen. Met een eenvoudige (brede veld) fluorescerende microscoop, wordt het licht van een bepaalde golflengte op een monster geschoren en absorbeert het monster een deel van dat licht en reflecteert de rest ervan op een langere golflengte. Het langere golflengtelicht gaat door een dichroïsche spiegel, waardoor het langere golflengtelicht mogelijk is, maar niet het oorspronkelijke (kortere) golflengtelicht om door te gaan. De persoon die het monster bekijkt, ziet alleen het licht dat door de dichroïsche spiegel is gegaan. Basisfluorescerende microscopen vangen zowel in-focus als out-of-focus licht, dat goed werkt voor grote monsters waar een zeer hoge resolutie niet vereist is. Het werkt niet zo goed voor het bekijken van fijne details. Een confocale microscoop is nodig om fluorescerende beelden met hoge resolutie vast te leggen.
De confocale microscoop gebruikt een pinhole om uit focuslicht te weigeren. In plaats van het licht dat alleen door een dich passeertRoic Mirror, licht wordt door zowel een dichroïsche spiegel als een pinhole geleid, wat betekent dat de persoon die het monster bekijkt slechts een enkel punt van het monster ziet. Om een heel monster te bekijken, scannen beweegbare spiegels licht over een rechthoekig vlak van het monster, en een computer verzamelt het uitgezonden licht naarmate het monster wordt gescand. Een complete scan zal resulteren in een optische plak of dwarsdoorsnede van het monster. Dit type microscopie wordt confocale laserscanmicroscopie genoemd, deels omdat een laser wordt gebruikt als de lichtbron.
Om een 3D -afbeelding te maken, worden verschillende scans gedaan, waardoor verschillende "plakjes" van het monster worden gemaakt, en een computer combineert elk plak om een driedimensionale afbeelding te maken. De microscoop kan worden geprogrammeerd om de ruimte tussen plakjes te variëren, afhankelijk van hoe knapperig een 3D -afbeelding de gebruiker wil verkrijgen. De microscoop kan ook de snelheid variëren waarmee hij een afbeelding scant,met langzaam scannen met een hogere resolutie dan snel scannen.
De confocale microscoop is in veel levenswetenschappelijke laboratoria een zeer gebruikte apparaat geworden. Ze zijn duur en enigszins groot en hebben vaak kamers die zijn gewijd aan het gebruik ervan, omdat de kamer donker moet zijn om een goed fluorescerend beeld te verkrijgen. Hoewel confocale microscopen het meest worden gebruikt om cellen en structuren in cellen te bekijken, kunnen ze worden gebruikt om een beeld van elk driedimensionaal fluorescerend monster te verkrijgen en worden ze soms gebruikt om halfgeleidersmaterialen te bekijken.