O que é um microscópio confocal?

Um microscópio confocal é um tipo específico de microscópio fluorescente usado para obter imagens 2D e 3D de alta qualidade. Com um microscópio fluorescente básico (de campo largo), a luz de um comprimento de onda específica é brilhado em uma amostra e a amostra absorve parte dessa luz e reflete o restante em um comprimento de onda mais longo. A luz mais longa do comprimento de onda passa através de um espelho dicróico, que permite a luz mais longa do comprimento de onda, mas não a luz original do comprimento de onda (mais curta). A pessoa que vê a amostra vê apenas a luz que passou pelo espelho dicróico. Os microscópios fluorescentes básicos capturam a luz em foco e fora do foco, que funciona bem para amostras grandes, onde não é necessária uma resolução muito alta. Não funciona tão bem para visualizar detalhes finos. É necessário um microscópio confocal para capturar imagens fluorescentes de alta resolução.

O microscópio confocal usa um orifício para rejeitar a luz fora do foco. Em vez de luz passando apenas por um dichROIC Mirror, a luz é passada por um espelho dicróico e um orifício, o que significa que a pessoa que vê a amostra vê apenas um único ponto da amostra. Para visualizar uma amostra inteira, os espelhos móveis escanem a luz em um plano retangular da amostra e um computador coleta a luz emitida à medida que o espécime é digitalizado. Uma varredura completa resultará em uma fatia óptica ou seção transversal da amostra. Esse tipo de microscopia é chamado de microscopia confocal de varredura a laser, em parte porque um laser é usado como fonte de luz.

Para criar uma imagem 3D, várias varreduras são feitas, criando várias "fatias" da amostra e um computador combina cada fatia para criar uma imagem tridimensional. O microscópio pode ser programado para variar o espaço entre as fatias, dependendo de quão nítida é uma imagem 3D que o usuário deseja obter. O microscópio também pode variar a velocidade com que digitaliza uma imagem,com a varredura lenta dando uma resolução mais alta do que a varredura rápida.

O microscópio confocal tornou-se um equipamento muito usado em muitos laboratórios de ciência da vida. Eles são caros e um pouco grandes, e geralmente têm quartos dedicados ao seu uso, porque a sala precisa estar escura para obter uma boa imagem fluorescente. Embora os microscópios confocais sejam mais comumente usados ​​para visualizar células e estruturas nas células, elas podem ser usadas para obter uma imagem de qualquer amostra fluorescente tridimensional e às vezes são usadas para visualizar materiais semicondutores.