Co je to konfokální mikroskop?
Konfokální mikroskop je zvláštní druh fluorescenčního mikroskopu používaného k získání vysoce kvalitních 2D a 3D obrazů. Pomocí základního (širokoúhlého) fluorescenčního mikroskopu svítí světlo o určité vlnové délce na vzorek a vzorek absorbuje část tohoto světla a zbytek odráží na delší vlnové délce. Čím delší je vlnová délka světla prochází dichroické zrcadlo, což umožňuje delší vlnové délky světla, ale není původní (kratší) vlnová délka průchod světla. Osoba, která prohlíží vzorek, vidí pouze světlo, které prošlo dichroickým zrcadlem. Základní fluorescenční mikroskop zachytit jak v zaostření a out-of-focus světla, který pracuje dobře pro velké vzorky, kde není požadováno velmi vysoké rozlišení. To nefunguje tak dobře pro prohlížení jemných detailů. K zachycení fluorescenčních obrázků s vysokým rozlišením je zapotřebí konfokální mikroskop.
Konfokální mikroskop používá dírku k vyřazení mimo zaostřovací světlo. Místo světla, které prochází pouze dichroickým zrcadlem, prochází světlo jak dichroickým zrcadlem, tak i dírkou, což znamená, že osoba, která prohlíží vzorek, vidí pouze jediný bod vzorku. Aby bylo možné sledovat celý vzorek, pohyblivá zrcadla skenování světlo přes obdélníkovým rovině vzorku, a počítač sbírá emitovaného světla jako vzorek dostane naskenovaný. Výsledkem úplného skenování bude optický řez nebo průřez vzorku. Tento typ mikroskopie se nazývá konfokální laserová skenovací mikroskopie, částečně proto, že jako zdroj světla se používá laser.
Chcete-li vytvořit 3D obraz, několik skeny jsou prováděny, vytvoření několika „řezy“ Ze vzorku, a počítač kombinuje každý řez pro vytvoření třírozměrného obrazu. Mikroskop může být naprogramován tak, aby měnil prostor mezi řezy v závislosti na tom, jak ostrý 3D obraz chce uživatel získat. Mikroskop může také měnit rychlost, jakou skenuje obraz, s pomalým skenováním, které poskytuje vyšší rozlišení než rychlé skenování.
Konfokální mikroskop se stal velmi běžně používaným zařízením v mnoha vědních laboratořích. Jsou drahé a poněkud velké, a často mají místnosti určené k jejich použití, protože potřeby pokoj za tmu, aby se dosáhlo dobrého fluorescenční obraz. Ačkoli konfokální mikroskopy se nejčastěji používají k prohlížení buněk a struktur uvnitř buněk, lze je použít k získání obrazu libovolného trojrozměrného fluorescenčního vzorku a někdy se používají k prohlížení polovodičových materiálů.