O que é purificação peptídica?
Os peptídeos
são pequenos polímeros compostos por aminoácidos. Muitos são biologicamente ativos como hormônios, toxinas ou outras habilidades. Tais compostos são frequentemente usados em pesquisa biológica, médica e química. Eles também servem como blocos de construção de proteínas quando os números deles estão ligados. A purificação do peptídeo é uma técnica usada para purificar grandes quantidades de um peptídeo desejado ou para ajudar a separar peptídeos gerados a partir da digestão de proteínas. A cromatografia líquida de alta pressão (HPLC) é comumente usada para purificação de peptídeos. O peptídeo ou peptídeos são aplicados em uma mistura de solventes que mudam ao longo do tempo, à medida que são bombeados em uma coluna de pequenas contas a alta pressão. Diferentes peptídeos eluem em momentos variados e são detectados por um monitor, freqüentemente um espectrofotômetro UV.
Ao realizar pesquisas sobre peptídeos, geralmente a substância de interesse é rara e não pode ser comprada de empresas químicas. Se a estrutura do peptídeo desejada for conhecida, é frequentemente mais fácil preparar quimicamente por síntese de peptídeos do que isolar o composto de fontes naturais. O isolamento de produtos naturais é notoriamente difícil. Os peptídeos sintéticos são geralmente purificados por hplc.
Essa síntese química pode ser assustadora para um pesquisador independente que não é químico. Freqüentemente, essa tarefa é contratada para empresas de síntese de peptídeos especializadas nessas técnicas. Isso pode ser mais econômico do que tentar configurar o sistema do zero em um laboratório. As empresas peptídicas podem tornar peptídeos personalizados adaptados às necessidades do pesquisador.
Outro motivo para a purificação de peptídeos pode ser quando um pesquisador purificou uma proteína e está tentando determinar seu identity. Ele ou ela pode degradar a proteína em fragmentos de peptídeos, separar os fragmentos por purificação e ter o padrão de fragmentação dos peptídeos detectados por um espectrômetro de massa enquanto eliminam da coluna. Esta técnica é conhecida como LC-MS, abreviação de espectrometria de massa de cromatografia líquida. Dá o peso molecular e a composição de aminoácidos dos fragmentos e geralmente permite a identificação de proteínas, se similares ou idênticas foram identificadas anteriormente.
Muitos pesquisadores trabalham com peptídeos que possuem novos recursos, como aminoácidos não naturais, para tentar encontrar aqueles com atividades biológicas incomuns. Existe um campo inteiro chamado peptidomimético dedicado ao estudo de tais novos peptídeos. Freqüentemente, as sequências geradas por computador são projetadas e uma biblioteca peptídica é sintetizada que abrange uma variedade de peptídeos atípicos. A purificação de peptídeos é usada para separar membros individuais desta biblioteca para fornecer peptídeo puro para testar acti biológicoVity. Essa estratégia foi bem-sucedida em gerar pelo menos um novo medicamento comercialmente disponível.
Muitos dos peptídeos biologicamente ativos são de interesse para usos médicos. Os compostos utilizados comercialmente, como a insulina, são comumente produzidos por sistemas de superexpressão de DNA recombinantes que geram grandes quantidades do composto desejado. Freqüentemente, os peptídeos são geneticamente projetados para facilitar a purificação, tendo algum tipo de tag adicionada às suas frentes. Isso permite que o uso da cromatografia de afinidade purifique o peptídeo.
Com esse tipo de cromatografia, a tag é um composto, como a histidina, que ligará uma matriz de contas, como níquel, escolhida por sua capacidade de ligar a tag. Proteínas e peptídeos indesejados geralmente passam pela coluna sem ligação. O peptídeo projetado especificamente geralmente se liga fortemente à coluna. Depois que as proteínas e peptídeos contaminantes foram lavados, o peptídeo desejado é eluído por um composto que competirligação à matriz. Um deles tem uma preparação bastante pura do peptídeo desejado, e a tag pode ser removida por clivagem.