Co je to značka molekulové hmotnosti?
Marker molekulové hmotnosti je molekula použitá k poskytnutí odhadu velikosti molekul podrobených gelové elektroforéze. Jedná se o techniku, při které se DNA, RNA nebo proteiny oddělí podle velikosti pomocí elektrického proudu na gelu. Tento termín by neměl být zaměňován s molekulárními markery v genetice - oblasti, ve kterých se DNA organismu liší od zbytku populace a lze ji identifikovat pomocí sondy DNA.
Markery molekulové hmotnosti proteinu se běžně používají, když jsou proteiny separovány gelovou elektroforézou. Marker molekulové hmotnosti je skupina proteinů o známé molekulové hmotnosti, které jsou obvykle poskytovány biotechnologickými společnostmi v určitém rozsahu velikostí. Jeden vybere rozsah velikostí na základě zkoumaných vzorků. Markery molekulové hmotnosti jsou naloženy dohromady a během testu se oddělí. Měřením vzdálenosti ujeté markery a sledovaným proteinem lze určit velikost experimentálního proteinu.
Různé typy značek lze vizualizovat různými způsoby. Některé z molekulárních markerů jsou neznačené a jsou zbarveny v gelu se zbytkem proteinů. Nejsou viditelné, dokud není celý gel zbarven. Jiné typy molekulárních markerů proteinu přicházejí předem obarvené barvami a každý typ proteinu má jinou barvu. Separace je viditelná při běhu gelu.
Jednou z výhod předem barveného markeru molekulové hmotnosti je Western blot. Jedná se o techniku, při které jsou proteiny přeneseny na membránu a poté obarveny protilátkami k detekci konkrétního proteinu. Mít barevné značky pomáhá určit, zda je přenos proteinů dokončen dříve, než bude pokračovat další postup.
Markery molekulové hmotnosti se běžně používají pro analýzu DNA na gelech. Molekulární markery DNA jsou často vyráběny z bakteriálního viru lambda . Restrikční enzymy jsou produkovány bakteriemi za účelem štěpení DNA invazních organismů a restrikční enzym HindIII se často používá k degradaci lambda DNA. Vytváří řadu různě velkých reprodukovatelných fragmentů známých jako DNA žebřík . Porovnáním vzdálenosti provedené standardy na logaritmické stupnici lze určit velikost analyzovaných fragmentů DNA.
Tento marker molekulové hmotnosti DNA lze použít k analýze velikosti DNA produkované během izolace genů a v experimentech genetického inženýrství. Může být také použit během polymerázové řetězové reakce (PCR), ve které je amplifikováno malé množství DNA nebo RNA za vzniku velkého množství produktu. Techniky PCR jsou běžně spojovány s testováním otcovství a forenzní vědou, ale jsou také velmi běžné v lékařském a základním biologickém výzkumu. Pro menší produkty generované některými typy PCR nebo malých molekul RNA jsou k dispozici speciální markery molekulové hmotnosti.