O que é um marcador de peso molecular?
Um marcador de peso molecular é uma molécula usada para fornecer uma estimativa do tamanho das moléculas submetidas à eletroforese em gel. Essa é uma técnica na qual DNA, RNA ou proteínas são separados por tamanho, usando uma corrente elétrica em um gel. Esse termo não deve ser confundido com marcadores moleculares na genética - áreas nas quais o DNA de um organismo difere do resto da população e pode ser identificado com uma sonda de DNA.
Marcadores de peso molecular de proteínas são comumente usados quando as proteínas são separadas por eletroforese em gel. O marcador de peso molecular é um grupo de proteínas de peso molecular conhecido, que geralmente são fornecidas por empresas de biotecnologia em uma faixa de tamanho específica. Um escolhe a faixa de tamanho com base nas amostras em estudo. Os marcadores de peso molecular são carregados juntos e separados durante a execução. Medindo a distância percorrida pelos marcadores e a proteína de interesse, pode-se determinar o tamanho da proteína experimental.
Diferentes tipos de marcadores podem ser visualizados de maneiras diferentes. Alguns dos marcadores moleculares não são marcados e são corados no gel com o restante das proteínas. Eles não são visíveis até que todo o gel esteja manchado. Outros tipos de marcadores moleculares de proteínas vêm pré-corados com cores, e cada tipo de proteína é de uma cor diferente. A separação é visível enquanto o gel está correndo.
Uma vantagem de um marcador de peso molecular pré-corado é para as transferências Western. Esta é uma técnica na qual as proteínas são transferidas para uma membrana e depois coradas com anticorpos para detectar uma proteína específica. Ter marcadores coloridos ajuda a determinar se a transferência das proteínas está completa antes de prosseguir com o restante do procedimento.
Marcadores de peso molecular são comumente usados para analisar DNA em géis. Freqüentemente, marcadores moleculares de DNA são feitos a partir do vírus bacteriano lambda . As enzimas de restrição são produzidas por bactérias para digerir o DNA dos organismos invasores, e a enzima de restrição HindIII é frequentemente usada para degradar o DNA lambda. Produz uma série de fragmentos reproduzíveis de tamanhos diferentes, conhecidos como uma escada de DNA . Ao comparar a distância percorrida pelos padrões em uma escala logarítmica, pode-se determinar o tamanho dos fragmentos de DNA que estão sendo analisados.
Este marcador de peso molecular de DNA pode ser usado para analisar o tamanho do DNA produzido durante o isolamento de genes e em experimentos de engenharia genética. Também pode ser usado durante a reação em cadeia da polimerase (PCR), na qual pequenas quantidades de DNA ou RNA são amplificadas para produzir grandes quantidades de produto. As técnicas de PCR são comumente associadas a testes de paternidade e ciência forense, mas também são muito comuns em pesquisas médicas e biológicas básicas. Marcadores especiais de peso molecular estão disponíveis para produtos menores gerados a partir de alguns tipos de PCR ou pequenas moléculas de RNA.