Hvad er en molekylær vægtmarkør?
En molekylvægtmarkør er et molekyle, der anvendes til at tilvejebringe et estimat af størrelsen af molekyler, der er udsat for gelelektroforese. Dette er en teknik, hvor DNA, RNA eller proteiner er adskilt efter størrelse ved hjælp af en elektrisk strøm på en gel. Dette udtryk bør ikke forveksles med molekylære markører i genetik - områder, hvor en organismes DNA adskiller sig fra resten af befolkningen og kan identificeres med en DNA -sonde.
Proteinmolekylvægtmarkører bruges ofte, når proteiner adskilles ved gelelektroforese. Molekylvægtmarkøren er en gruppe proteiner med kendt molekylvægt, som generelt leveres af bioteknologiselskaber i et bestemt størrelsesområde. Man vælger størrelsesområdet baseret på de undersøgte prøver. Molekylvægtmarkørerne indlæses sammen og adskilles under løbet. Ved at måle den afstand, der er kørt af markørerne og proteinet af interesse, kan man bestemme størrelsen på det eksperimentelle protein.
Forskellige TYPES af markører kan visualiseres på forskellige manerer. Nogle af de molekylære markører er umærkede og er farvet i gelen med resten af proteinerne. De er ikke synlige, før hele gelen er farvet. Andre typer proteinmolekylære markører er forudfarvet med farver, og hver type protein er en anden farve. Adskillelsen er synlig, når gelen kører.
En fordel ved en forudfarvet molekylvægtmarkør er til vestlige blots. Dette er en teknik, hvor proteinerne overføres til en membran og derefter farves med antistoffer for at detektere et bestemt protein. At have farvede markører hjælper med at bestemme, om overførslen af proteinerne er komplet, før man fortsætter med resten af proceduren.
Molekylvægtmarkører bruges ofte til analyse af DNA på geler. Ofte er DNA -molekylære markører fremstillet af bakterievirus lambda . Begrænsning EnzyMES er lavet af bakterier til at fordøje DNA for invaderende organismer, og restriktionsenzymet hindiii bruges ofte til at nedbryde lambda -DNA'et. Det producerer en række forskellige størrelser, reproducerbare fragmenter kendt som en DNA-stige . Ved at sammenligne afstanden, der drives af standarderne i en logaritmisk skala, kan man bestemme størrelsen på DNA -fragmenterne, der analyseres.
Denne DNA -molekylvægtmarkør kan bruges til at analysere størrelsen på DNA produceret under isoleringen af gener og i genetiske ingeniøreksperimenter. Det kan også anvendes under polymerasekædereaktionen (PCR), hvor små mængder DNA eller RNA amplificeres for at producere store mængder produkt. PCR -teknikker er ofte forbundet med faderskabstest og retsmedicinsk videnskab, men de er også meget almindelige inden for medicinsk og grundlæggende biologisk forskning. Særlige molekylvægtmarkører er tilgængelige for mindre produkter genereret fra nogle typer PCR eller små RNA -molekyler.