Co je Western Blot?

Western blot je technika laboratorní analýzy, která se používá k izolaci proteinů. Může být použit při diagnostice určitých chorob a také při výzkumu různých proteinů a procesů. Západní skvrna je spojena s diagnózou infekce HIV, ale lze ji také použít k vyhledání stop bovinní spongiformní encefalitidy (BSE) a Lymeovy choroby. Vzorky odeslané k testování pomocí protokolu western blot mohou v závislosti na laboratorní kapacitě a naléhavosti vrátit výsledky za několik dní až několik týdnů.

V Western blotu je vzorek, který může být z krve nebo tkáně, nejprve podroben elektroforéze, takže proteiny se oddělí podle délky. Pruh elektroforézního gelu s izolovanými proteiny cílové délky může být použit k přenosu proteinů na nitrocelulózový substrát pro další fázi testu. Během této fáze je do vzorku zavedena protilátka, jejímž cílem je značení proteinů antigeny, na které se tato protilátka zamkne.

Jakmile jsou proteiny označeny, lze je snadno identifikovat. V případě testování na nemoc přítomnost reaktivního proteinu naznačuje, že vzorek byl testován pozitivně. Western blot málokdy vrací falešně pozitivní výsledky, i když se to může občas stát, a mohou také vrátit falešné negativy, ve kterých má člověk skutečně nemoc, ale u testování western blot se to neukazuje. To může být obzvláště běžné v případech, kdy se původce nemoci ještě nezačal replikovat.

Vědci mohou výsledky použít k identifikaci konkrétních proteinů, které sledují, a pro řadu dalších účelů. Pochopení toho, jak funguje protokol western blot, je pro některé vědce a laboratorní techniky důležitou dovedností, protože musí být schopni pomocí této metody vrátit spolehlivé a spolehlivé výsledky. Laboratorní dovednosti včetně učení, jak zacházet se složitými nebo špatnými vzorky a jak se vyhnout kontaminaci během procesu tak, aby výsledky testu byly známy.

Tato technika je někdy známá jako imunoblot, protože v podstatě požadované proteiny jsou „blotovány“ protilátkami, takže se projeví. Tento test může být použit k vyhledání proteinů u všech zvířat, nejen u lidí, přičemž veterináři často používají test western blot k určení, zda bylo nebo nebylo stádo krav infikováno nebo vystaveno BSE.