Qu'est-ce que le Western Blot?
Un western blot est une technique d'analyse en laboratoire utilisée pour isoler des protéines. Il peut être utilisé dans le diagnostic de certaines maladies, ainsi que dans la recherche sur divers protéines et processus. Il est notoire que le Western blot est associé au diagnostic d'infection par le VIH, mais il peut également être utilisé pour rechercher des traces d'encéphalite spongiforme bovine (ESB) et de la maladie de Lyme. Les échantillons envoyés pour analyse avec un protocole Western blot peuvent renvoyer les résultats en quelques jours à plusieurs semaines, en fonction de la capacité du laboratoire et de l'urgence.
Dans un transfert Western, l'échantillon, qui peut provenir de sang ou de tissu, est d'abord soumis à une électrophorèse afin que les protéines se séparent par la longueur. Une bande du gel d'électrophorèse avec des protéines isolées de la longueur cible peut être utilisée pour transférer les protéines sur un substrat de nitrocellulose en vue de l'étape suivante du test. Au cours de cette étape, un anticorps est introduit dans l’échantillon dans le but de marquer les protéines avec des antigènes que cet anticorps verrouille.
Une fois que les protéines ont été marquées, elles peuvent être facilement identifiées. Dans le cas du dépistage de la maladie, la présence d'une protéine réactive indique que l'échantillon a été testé positif. Les transferts Western transfèrent rarement des résultats faussement positifs, bien que cela puisse arriver à l'occasion, mais ils peuvent également renvoyer des résultats faux négatifs dans lesquels une personne a réellement une maladie, mais cela ne se voit pas sur les tests de transfert Western. Cela peut être particulièrement fréquent dans les cas où l'agent responsable de la maladie n'a pas encore commencé à se répliquer.
Les chercheurs peuvent utiliser les résultats pour identifier des protéines spécifiques sur lesquelles ils effectuent un suivi, et à diverses autres fins. Comprendre le fonctionnement du protocole Western Blot est une compétence importante pour certains chercheurs et techniciens de laboratoire, car ils doivent être en mesure de restituer des résultats fiables à l'aide de cette méthode. Compétences de laboratoire, y compris apprendre à manipuler des échantillons complexes ou de mauvaise qualité et à éviter la contamination pendant le processus, afin que les résultats du test soient connus pour être vrais.
Cette technique est parfois appelée immunoblot, car essentiellement les protéines désirées sont «transférées» avec des anticorps afin qu’elles apparaissent. Ce test peut être utilisé pour rechercher des protéines chez tous les animaux, pas seulement les humains, les vétérinaires utilisant souvent le test Western blot pour déterminer si un troupeau de vaches a été infecté ou exposé à l'ESB.