Cos'è la Western Blot?
Una macchia occidentale è una tecnica di analisi di laboratorio che viene utilizzata per isolare le proteine. Può essere utilizzato nella diagnosi di alcune malattie e anche nella ricerca su varie proteine e processi. È noto che la macchia occidentale è collegata alla diagnosi di infezione da HIV, ma può anche essere usata per cercare tracce di encefalite spongiforme bovina (BSE) e malattia di Lyme. I campioni inviati per i test con un protocollo Western Blot possono restituire risultati in pochi giorni a diverse settimane, a seconda della capacità del laboratorio e dell'urgenza.
In una macchia occidentale, il campione, che può provenire da sangue o tessuto, viene prima sottoposto all'elettroforesi in modo che le proteine si separino per lunghezza. Una striscia di gel per elettroforesi con proteine isolate della lunghezza target può essere utilizzata per trasferire le proteine su un substrato di nitrocellulosa per la fase successiva del test. Durante questa fase, un anticorpo viene introdotto nel campione, con l'obiettivo di etichettare le proteine con antigeni a cui si fissa l'anticorpo.
Una volta che le proteine sono state taggate, possono essere facilmente identificate. Nel caso di test per la malattia, la presenza di una proteina reattiva indica che il campione è risultato positivo. Le macchie occidentali raramente restituiscono falsi positivi, anche se può accadere in alcune occasioni, e possono anche restituire falsi negativi, in cui una persona ha effettivamente una malattia, ma non si manifesta con i test Western Blot. Ciò può essere particolarmente comune nei casi in cui l'agente patogeno non ha ancora iniziato a replicarsi.
I ricercatori possono utilizzare i risultati per identificare proteine specifiche che stanno monitorando e per una varietà di altri scopi. Comprendere come funziona il protocollo western blot è un'abilità importante per alcuni ricercatori e tecnici di laboratorio, poiché devono essere in grado di restituire risultati affidabili e affidabili utilizzando questo metodo. Competenze di laboratorio, incluso l'apprendimento di come gestire campioni complicati o difettosi e come evitare la contaminazione durante il processo in modo che i risultati del test siano noti.
Questa tecnica è talvolta nota come immunoblot, perché essenzialmente le proteine desiderate vengono "macchiate" con anticorpi in modo che si manifestino. Questo test può essere utilizzato per cercare proteine in tutti gli animali, non solo nell'uomo, con i veterinari che spesso utilizzano il test Western Blot per determinare se una mandria di mucche è stata infettata o esposta all'ESB.