O que é o Western Blot?
Western blot é uma técnica de análise laboratorial usada para isolar proteínas. Pode ser usado no diagnóstico de certas doenças e também em pesquisas sobre várias proteínas e processos. Famosamente, a mancha ocidental está ligada ao diagnóstico de infecção pelo HIV, mas também pode ser usada para procurar traços de encefalite espongiforme bovina (BSE) e doença de Lyme. As amostras enviadas para teste com um protocolo Western Blot podem retornar resultados em alguns dias a várias semanas, dependendo da capacidade do laboratório e da urgência.
Em uma mancha ocidental, a amostra, que pode ser de sangue ou tecido, é primeiramente submetida a eletroforese para que as proteínas se separem por comprimento. Uma tira do gel de eletroforese com proteínas isoladas do comprimento alvo pode ser usada para transferir as proteínas para um substrato de nitrocelulose para a próxima etapa do teste. Durante esse estágio, um anticorpo é introduzido na amostra, com o objetivo de marcar as proteínas com antígenos aos quais esse anticorpo se prende.
Uma vez marcadas as proteínas, elas podem ser facilmente identificadas. No caso de testes para doenças, a presença de uma proteína reativa indica que a amostra foi positiva. As manchas ocidentais raramente retornam falsos positivos, embora isso possa ocorrer ocasionalmente, e elas também podem retornar falsos negativos, nos quais uma pessoa realmente tem uma doença, mas isso não aparece nos testes de manchas ocidentais. Isso pode ser especialmente comum nos casos em que o agente causador da doença ainda não começou a se replicar.
Os pesquisadores podem usar os resultados para identificar proteínas específicas que estão rastreando e para uma variedade de outros propósitos. Compreender como o protocolo Western Blot funciona é uma habilidade importante para alguns pesquisadores e técnicos de laboratório, pois eles devem ser capazes de retornar resultados confiáveis e confiáveis usando esse método. Habilidades de laboratório, incluindo aprender a lidar com amostras complicadas ou ruins e como evitar a contaminação durante o processo, para que os resultados do teste sejam verdadeiros.
Essa técnica é às vezes conhecida como imunotransferência, porque essencialmente as proteínas desejadas são "transferidas" com anticorpos para que apareçam. Este teste pode ser usado para procurar proteínas em todos os animais, não apenas nos seres humanos, com os veterinários frequentemente usando o teste Western Blot para determinar se um rebanho de vacas foi ou não infectado ou exposto à BSE.