Hvad er en transfektionsreagens?
En transfektionsreagens er en bærer for DNA, som en forsker kan bruge til at indsætte DNA'et i celler i kultur. En række typer reagenser er tilgængelige gennem life science-virksomheder, og forskere kan også udvikle deres egne til brugerdefinerede applikationer. Disse molekyler kan arbejde på en række forskellige måder for at føre DNA ind i målcellerne og indsætte det i deres genom. Den typiske proces involverer blanding af det ønskede DNA med reagenset, tilsætning af det til celler i kultur, inkubering af dem og derefter screening for at se, hvilket indeholder det nye DNA.
DNA-transfektion er et meget vigtigt forskningsværktøj. Forskere kan indsætte genetisk materiale for at tænde gener eller dæmpe dem og kan bruge transfektion til at tvinge celler i kultur til at udføre på en bestemt måde. Målet kan være kortvarig genetisk ekspression med henblik på undersøgelsen. Det kan også være en permanent modifikation, der giver forskeren mulighed for at oprette en koloni af klonede celler, der alle udtrykker det samme gen. Disse celler kan bruges til forskning og kan have terapeutiske anvendelser.
Calciumphosphat er en af de ældste transfektionsreagenser. Forskere bruger også lipidbaserede materialer, som har en tendens til at være meget effektive. De kan også bruge virale DNA-vektorer såvel som mekaniske metoder som mikroinjektion, hvor det ønskede DNA injiceres direkte for at reducere risikoen for nedbrydning af materialet. Genpistoler er et andet populært værktøj til DNA-transfektion.
Når en forsker vælger en transfektionsreagens, er der et antal overvejelser. Disse inkluderer, hvordan reagenset vil blive brugt, hvilken type DNA der er involveret, og hvilken slags effekter forskeren ønsker. Transfektionsreagenset er ikke altid helt pålideligt, og forskeren har også brug for et godt screeningsværktøj til at finde og isolere de vellykkede transficerede celler. Dette vil gøre det muligt for forskerne at kassere celler, der ikke accepterede det nye genetiske materiale sammen med celler, der gjorde det, men udtrykker det på en usædvanlig måde, der antyder, at en vis nedbrydning af DNA'et kan have fundet sted.
DNA-transfektionsreagenslister er tilgængelige fra life science-virksomheder. De fleste har et diagram, der hjælper forskere med at beslutte, hvilke de skal bruge, på grundlag af celletype og hvilken slags genetisk materiale forskeren ønsker at indsætte. Forskere kan normalt anmode om prøver for at give dem mulighed for at teste et reagens, før de forpligter sig til at bruge det i forskning. Det er vigtigt at læse dokumentationen omhyggeligt for at sikre, at driften af transfektionsreagenset er fuldt ud forstået inden brug.