Hvad er polyacrylamidgel?
Polyacrylamidgel er en opløsning, der ofte bruges i elektroforese, processen med at adskille molekyler eller partikler i forskellige størrelser ved at føre dem gennem en gel og påføre elektrisk strøm. Der er forskellige opskrifter på polyacrylamidgel, men det indeholder typisk acrylamid, vand, en buffer, ammoniumpersulfat (APS) og tetramethylethylendiamin (TEMED). Denne gel fungerer som en matrix, der adskiller forbindelser baseret på deres ladning og størrelse; Jo mere acrylamid i gelopløsningen, jo bedre adskillelse af mindre molekyler. Denne gel bruges typisk til protein- og DNA -adskillelse.
Ved elektroforese får et elektrisk felt opladede partikler til at bevæge sig gennem en gel, der fungerer som en sigte for at få de forskellige størrelser til at adskille sig. Gelen absorberer enhver varme, der er produceret fra den elektriske strøm. Polyacrylamidgel bruges ofte i denne procedure, men agarose, et andet kemikalie, der skaber en lignende gel, kan også bruges.
geler CAn være lavet af varierende koncentration med mængden af acrylamid, der spænder fra ca. 6% til 15%. Ved blanding af gelen er acrylamidet upolymeriseret, hvilket betyder, at det forbliver som enkeltmolekyler. Tilsætningen af andre kemikalier, der fremmer binding, såsom TEMED, får molekylerne til at forbinde med at danne lange kæder - den "poly" del af polyacrylamid.
Den største fordel ved polyacrylamidgel er, at antallet af bindingsobligationer og hårdhed kan kontrolleres baseret på den oprindelige mængde acrylamid og TEMED tilsat. En hovedfaktor i acrylamidkoncentration er størrelsen på, at molekylet analyseres. Jo mindre forbindelserne der adskilles, jo mere acrylamid er nødvendig; Meget små partikler adskilles ved hjælp af den højeste koncentration, 15 procent.
acrylamid fungerer ved at kontrollere mængden af friktion i gelen; Gelens hårdhed bestemmer mængden af frikterion. Forbindelser, der er store, bevæger sig langsommere gennem gelen, da der naturligt er mere friktion eller modstand på grund af deres størrelse. Mindre forbindelser bevæger sig hurtigere, da der er mindre friktion. For at forhindre, at små forbindelser bevæger sig fra gelen, tilsættes mere acrylamid for at skabe mere friktion.
DNA -polyacrylamidgel bruges til at adskille DNA -strenge med forskellig længde. Stykker af DNA adskiller sig med så lidt som et nukleotid, forbindelserne, der udgør hver streng. For at vide, hvilke stykker der henviser til de specifikke størrelser, køres en standard, der indeholder fragmenter af en kendt størrelse, ofte sammen med prøver. DNA -stykkerne sammenlignes derefter med standarden, og størrelsen på strengen bestemmes.
En lignende procedure bruges til at bestemme størrelsen på proteiner, oftest dem i blod. Blod indeholder to hovedtyper af protein: globulin, et stort protein og serumalbumin, et meget lille, negativt ladet protein. Adskillelse ved hjælp af polyacrylamidgel er osredigeret for at bestemme mængden af hver type.