Hvad er Giemsa Stain?
Giemsa-plet er en standardiseret blanding af farvestoffer, der får forskellige celletyper til at skille sig klart ud i en blodudtværing eller en tynd skive væv. Denne plet er opkaldt efter den tyske kemiker, Gustav Giemsa, der først udviklede den til sit arbejde med at studere parasitten, der forårsager malaria - Plasmodium . For at sikre, at teknikeren, der undersøger prøven, kan opnå en nøjagtig aflæsning, skal trinene i farvningsproceduren standardiseres såvel som blandingen af farvestoffer. Giemsa-plet kaldes en differentiel plet, fordi den producerer forskellige farver afhængigt af hvad den binder til, såsom cytoplasma eller DNA.
Formlen til Giemsa-plet er blevet justeret over tid for at forbedre stabiliteten af farvestoffer og de resulterende farver. Aktuelle standardblandinger inkluderer methylenblåt, eosin og undertiden azurblå B. Disse farvestoffer opbevares ofte i en tør pulverform og blandes med vand lige inden de bruges. Hvis der er vand i farvestoffeblandingen, før den bruges, oxideres og pletter forkert.
De nøjagtige trin i proceduren til anvendelse af Giemsa-farvning kan variere afhængigt af hvilken organisme eller celletype prøven undersøges for samt sammensætningen af selve prøven. En prøve, der vil blive farvet ved hjælp af Giemsa-pletten, smøres normalt på eller fastgøres på et objektglas meget kort efter, at det er samlet. En tynd blodudstrygning fastlægges generelt ved at dyppes i methanol, mens en tyk blodudstrygning simpelthen får lov til at tørre fuldstændigt ved stuetemperatur. Derefter blødgøres objektglasset i pletten i en bestemt tidsperiode og skylles derefter med vand, der har en neutral pH. Dias får lov til at lufttørre før visning.
På grund af den differentielle farvning, der er produceret af Giemsa-farvning, plasmodiumcytoplasma pletter lyseblå, mens DNA'et forekommer rødt eller lilla. En anden parasit, Giardia lamblia, er farvet lyserød-lilla undtagen for DNA'et, der farver meget mørkeblå. Histoplasma capsulatum, en svamp, findes i dens gærform i humane hvide blodlegemer og pletter mørkeblå.
Denne farvningsproces er også nyttig i kromosomundersøgelser og til visualisering af forskellene mellem forskellige blodlegemer. Et kromosom pletter meget mørkeblå i nogle sektioner og lyseblå i andre. Dette medfører en båndeffekt, der hjælper genetikere med at finde steder, hvor kromosomerne har gennemgået usædvanlige ændringer. Røde blodlegemer pletter lyserøde, mens granulaterne i mastceller dukker op som lilla pletter. Hvide blodlegemer pletter forskellige nuancer af blåt, så de forskellige typer - basofiler, eosinofiler, neutrofiler og andre - kan skelnes fra hinanden.