Hoe werkt het testen van bacteriële endotoxinen?
Bacteriële endotoxinetests omvatten typisch het gebruik van reagentia die, wanneer gemengd in een oplossing met een mogelijke contaminant, een reactie veroorzaken, hetgeen de aanwezigheid van een endotoxine betekent. Chromogene tests, de gelstollingstest en turbidimetrische tests zijn de methoden die wetenschappers gewoonlijk gebruiken voor het testen van bacteriële endotoxinen. Technici gebruiken deze evaluatiemethoden voor verschillende stoffen en objecten bij het controleren op endotoxineverontreiniging. Water, de grondstoffen die worden gebruikt bij het maken van medicijnen, apparatuur en verpakking moeten allemaal voldoen aan de endotoxinestandaarden.
Bacteriën, schimmels en virussen hebben allemaal beschermende buitenmembranen bestaande uit lipopolysacchariden, ook wel LPS genoemd. Het lipidegedeelte van deze ketens bevat endotoxinen. Deze stoffen blijven in het algemeen in het membraan maar komen vrij tijdens het proces van celdeling en tijdens cellulaire vernietiging of lysis. Bij mensen veroorzaken deze stoffen koorts, abnormale stolling, septische shock en andere symptomen, hoewel endotoxinen, in tegenstelling tot exotoxinen in de cel, niet worden omgezet in een toxoïde. Over het algemeen controleren microbiologen op de aanwezigheid van endotoxinen geassocieerd met verschillende gram-negatieve bacteriën, waaronder E. coli .
De gelstolseltest, of Limulus ameboecyte lysate (LAL) -test, omvat het gebruik van een membraanvernietigende chemische stof afgeleid van de amoebocyten van de hoefijzerkrab, ook wel Limulus polyphemus genoemd. Technici nemen een positieve indicatie van endotoxinen waar als stolling of gelvorming optreedt wanneer het lysaat wordt blootgesteld aan het object of de stof in kwestie. Microbiologen gebruiken deze methode van bacteriële endotoxinetests meestal in combinatie met chromogene en turbidimetrische tests voor overtuigende resultaten.
Chromogene bacteriële endotoxinetests maken gebruik van een speciaal behandelde LAL. Wanneer dit lysaat in contact komt met een endotoxine, produceert de reactie een specifieke kleur. Het laatste testproces omvat het meten van de troebelheid of troebelheid van de oplossing. Technici stellen de in de gelstollingstest gevormde oplossing bloot aan een spectrofotometer die een lichtstraal uitzendt. Door het verlies aan lichtintensiteit in de straal te meten terwijl deze door de oplossing gaat, kunnen microbiologen bepalen of er een endotoxine aanwezig is.
Lab-medewerkers voltooien deze drie bacteriële endotoxinetests over het algemeen twee of drie keer om nauwkeurige resultaten te garanderen. De geltest wordt niet exclusief gebruikt, omdat de laagste detectielimiet 0,03 Ehrlich-eenheden per milliliter (EU / ml) is. Chromogene en turbidimetrische testen detecteren endotoxinen in het bereik van 0,005 EU / ml. Veiligheidsparameters verschillen sterk, afhankelijk van de te testen stof. Terwijl steriel water dat wordt gebruikt voor injectie of irrigatie niet meer dan 0,25 EU / ml kan bevatten, kan steriel water voor inhalatiedoeleinden tot 0,5 EU / ml bevatten.