Comment fonctionnent les tests d'endotoxines bactériennes?
Le test des endotoxines bactériennes implique généralement l'utilisation de réactifs qui, lorsqu'ils sont mélangés dans une solution avec un contaminant possible, provoquent une réaction, ce qui signifie la présence d'une endotoxine. Le test chromogénique, le test de coagulation sur gel et le test turbidimétrique sont les méthodes couramment utilisées par les scientifiques pour le test des endotoxines bactériennes. Les techniciens utilisent ces méthodes d'évaluation pour une variété de substances et d'objets lors de la vérification de la contamination par endotoxines. L'eau, les matières premières utilisées dans la fabrication des médicaments, des équipements et des emballages doivent toutes satisfaire aux normes relatives aux endotoxines.
Les bactéries, les champignons et les virus ont tous une membrane extérieure protectrice constituée de lipopolysaccharides, également appelée LPS. La partie lipidique de ces chaînes contient des endotoxines. Ces substances restent généralement dans la membrane mais sont libérées au cours du processus de division cellulaire et lors de la destruction ou de la lyse cellulaire. Chez l'homme, ces substances provoquent de la fièvre, une coagulation anormale, un choc septique et d'autres symptômes bien que, contrairement aux exotoxines dans la cellule, les endotoxines ne se transforment pas en toxoïde. En général, les microbiologistes vérifient la présence d’endotoxines associées à diverses bactéries à Gram négatif, y compris E. coli .
Le test de coagulation sur gel, ou dosage LAL (Limulus Ameboecyte Lysat), consiste à utiliser un produit chimique détruisant la membrane, dérivé des amibocytes du crabe fer à cheval, également appelé Limulus polyphemus. Les techniciens observent une indication positive d'endotoxines en cas de coagulation ou de gélification lorsque le lysat est exposé à l'objet ou à la substance en question. Les microbiologistes utilisent généralement cette méthode de test des endotoxines bactériennes en conjonction avec des tests chromogéniques et turbidimétriques pour obtenir des résultats concluants.
Le test des endotoxines bactériennes chromogènes utilise un LAL spécialement traité. Lorsque ce lysat entre en contact avec une endotoxine, la réaction produit une couleur spécifique. Le processus de test final comprend la mesure de la turbidité ou de la nébulosité de la solution. Les techniciens exposent la solution formée lors du test de coagulation sur gel à un spectrophotomètre émettant un faisceau de lumière. En mesurant la perte d'intensité lumineuse dans le faisceau lorsqu'il traverse la solution, les microbiologistes peuvent déterminer si une endotoxine est présente ou non.
Les laboratoires assistent généralement deux ou trois fois à ces trois tests d’endotoxine bactérienne afin d’obtenir des résultats précis. Le test sur gel n'est pas utilisé exclusivement car sa limite de détection la plus basse est de 0,03 unité Ehrlich par millilitre (UE / ml). Les tests chromogéniques et turbidimétriques détectent des endotoxines dans la gamme de 0,005 UE / ml. Les paramètres de sécurité varient considérablement en fonction de la substance testée. Alors que l'eau stérile utilisée pour l'injection ou l'irrigation ne peut contenir plus de 0,25 UE / ml, l'eau stérile destinée à l'inhalation peut contenir jusqu'à 0,5 UE / ml.