Jak funguje bakteriální testování endotoxinu?
Bakteriální testování endotoxinu obvykle zahrnuje použití činidel, která, když se smíchají v roztoku s možným kontaminantem, způsobují reakci, což znamená přítomnost endotoxinu. Chromogenní testování, test gelového sraženiny a testování turbidimetrického testu jsou metody, které vědci běžně používají pro testování bakteriálního endotoxinu. Technici používají tyto metody hodnocení na různých látkách a objektech při kontrole kontaminace endotoxinu. Voda, suroviny používané při výrobě léků, vybavení a obalu musí procházet standardy endotoxinu.
Bakterie, houby a viry mají ochranné vnější membrány sestávající z lipopolysacharidů, také označovaných jako LPS. Lipidová část těchto řetězců obsahuje endotoxiny. Tyto látky obecně zůstávají uvnitř membrány, ale uvolňují se během procesu dělení buněk a během buněčného destrukce nebo lýzy. U lidí způsobují tyto látky horečku, abnormální koagulaci, septický šok a další sympte.OMS Ačkoli na rozdíl od exotoxinů v buňce, endotoxiny se nepřevádějí na toxoid. Obecně mikrobiologové kontrolují přítomnost endotoxinů spojených s různými gramnegativními bakteriemi, včetně e. coli .
Test gelového sraženiny nebo test limulus ameboecyte lyzát (LAL) zahrnuje použití chemické látky ničících membránu odvozující se z amoebocytů podkovy, které jsou také označovány jako limulus polyphys. dotyčný předmět nebo látka. Mikrobiologové obvykle používají tuto metodu bakteriálního endotoxinového testování ve spojení s chromogenním a turbidimetrickým testováním na přesvědčivé výsledky.
Chromogenní testování bakteriálního endotoxinu používá speciálně ošetřený LAL. Když tento lyzát kontaktuje endotoxin, reakce vytváří specifickou barvu. Poslední testovací proces zahrnuje měření zákalu nebo oblačnosti řešení. Technici vystavují roztok vytvořený v testu gelové sraženiny spektrofotometru, který vydává paprsek světla. Měřením ztráty intenzity světla v paprsku, když prochází roztokem, mohou mikrobiologové určit, zda je přítomen endotoxin.
Lab Associates obecně dokončují tyto tři bakteriální endotoxinové testy dvakrát nebo třikrát, aby se zajistily přesné výsledky. Gelový test se nepoužívá výhradně, protože jeho nejnižší limit detekce je 0,03 jednotek Ehrlich na mililitr (EU/ml). Chromogenní a turbidimetrické testování detekují endotoxiny v rozsahu 0,005 EU/ml. Bezpečnostní parametry se velmi liší v závislosti na testované látce. Zatímco sterilní voda používaná pro účely injekce nebo zavlažování nemůže obsahovat ne více než 0,25 EU/ml, sterilní voda pro inhalační účely může obsahovat až 0,5 EU/ml.