Jak funguje testování bakteriálních endotoxinů?
Testování bakteriálních endotoxinů obvykle zahrnuje použití činidel, která, pokud jsou smíchána v roztoku s možným kontaminantem, způsobují reakci, což znamená přítomnost endotoxinu. Chromogenní testování, test gelové sraženiny a turbidimetrické testování jsou metody, které vědci běžně používají pro testování bakteriálních endotoxinů. Technici používají tyto metody hodnocení u různých látek a předmětů při kontrole kontaminace endotoxiny. Voda, suroviny používané při výrobě léků, vybavení a balení musí splňovat endotoxinové standardy.
Bakterie, houby a viry mají ochrannou vnější membránu sestávající z lipopolysacharidů, také označovaných jako LPS. Lipidová část těchto řetězců obsahuje endotoxiny. Tyto látky obvykle zůstávají v membráně, ale uvolňují se během procesu buněčného dělení a během buněčné destrukce nebo lýzy. U lidí tyto látky způsobují horečku, abnormální koagulaci, septický šok a další příznaky, i když na rozdíl od exotoxinů v buňce se endotoxiny nepřevádějí na toxoid. Obecně mikrobiologové kontrolují přítomnost endotoxinů spojených s různými gramnegativními bakteriemi, včetně E. coli .
Test na gelové sraženině nebo test na lyzát Limulus ameboecyte (LAL) zahrnuje použití chemické látky ničící membrány odvozené od amoebocytů krabů podkovy, také označovaných jako Limulus polyphemus. Technici pozorují pozitivní indikaci endotoxinů, pokud dojde ke srážení nebo gelovatění, když je lyzát vystaven dotyčnému předmětu nebo látce. Mikrobiologové obvykle používají tuto metodu testování bakteriálních endotoxinů ve spojení s chromogenním a turbidimetrickým testováním pro přesvědčivé výsledky.
Testování chromogenních bakteriálních endotoxinů používá speciálně ošetřenou LAL. Když se tento lyzát dostane do kontaktu s endotoxinem, reakce vytvoří specifickou barvu. Konečný testovací proces zahrnuje měření zákalu nebo zákalu roztoku. Technici vystavují roztok vytvořený při testu gelové sraženiny spektrofotometru, který emituje paprsek světla. Měřením ztráty intenzity světla v paprsku při jeho průchodu roztokem mohou mikrobiologové určit, zda je nebo není přítomen endotoxin.
Associates Lab obecně dokončují tyto tři bakteriální endotoxinové testy dvakrát nebo třikrát, aby se zajistily přesné výsledky. Gelový test se nepoužívá výhradně, protože jeho nejnižší detekční limit je 0,03 Ehrlich jednotek na mililitr (EU / ml). Chromogenní a turbidimetrické testování detekuje endotoxiny v rozmezí 0,005 EU / ml. Bezpečnostní parametry se velmi liší v závislosti na zkoušené látce. Zatímco sterilní voda použitá pro injekční nebo zavlažovací účely může obsahovat ne více než 0,25 EU / ml, sterilní voda pro inhalační účely může obsahovat až 0,5 EU / ml.