Hur fungerar bakteriell endotoxintestning?
Bakteriell endotoxintestning involverar vanligtvis användning av reagens som, när de blandas i en lösning med en möjlig förorening, orsakar en reaktion, vilket indikerar närvaron av ett endotoxin. Kromogentestning, gelkoageltest och turbidimetrisk testning är de metoder som forskare vanligtvis använder för bakteriell endotoxintestning. Tekniker använder dessa utvärderingsmetoder på olika ämnen och föremål när de kontrollerar för endotoxinföroreningar. Vatten, de råvaror som används vid tillverkning av mediciner, utrustning och förpackningar måste alla uppfylla endotoxinstandarder.
Bakterier, svampar och virus har alla skyddande yttermembran som består av lipopolysackarider, även kallad LPS. Lipiddelen av dessa kedjor innehåller endotoxiner. Dessa ämnen förblir vanligtvis inom membranet men frigörs under processen med celldelning och under cellulär förstörelse eller lys. Hos människor orsakar dessa ämnen feber, onormal koagulation, septisk chock och andra symtom även om till skillnad från exotoxiner i cellen omvandlas inte endotoxiner till en toxoid. I allmänhet kontrollerar mikrobiologer närvaron av endotoxiner associerade med olika gramnegativa bakterier, inklusive E. coli .
Gelkoagulstestet, eller Limulus ameboecytlysat (LAL) -analys, innefattar användning av en membranförstörande kemikalie härrörande från amoebocyterna hos hästskokrabben, även kallad Limulus polyphemus. Tekniker observerar en positiv indikation på endotoxiner om koagulation eller gelning inträffar när lysatet utsätts för föremålet eller ämnet i fråga. Mikrobiologer använder vanligtvis denna metod för bakteriell endotoxintestning i samband med kromogen och turbidimetrisk testning för slutgiltiga resultat.
Kromogent bakterieendotoxintestning använder en speciellt behandlad LAL. När detta lysat kommer i kontakt med ett endotoxin ger reaktionen en specifik färg. Den slutliga testprocessen inkluderar att mäta lösningens grumlighet eller molnighet. Tekniker utsätter lösningen som bildas i gelkoagulstestet för en spektrofotometer, som avger en ljusstråle. Genom att mäta förlusten av ljusintensitet i strålen när den passerar genom lösningen, kan mikrobiologer bestämma om ett endotoxin är närvarande eller inte.
Labmedarbetare genomför i allmänhet dessa tre bakteriella endotoxintest två eller tre gånger för att säkerställa exakta resultat. Geltestet används inte uteslutande eftersom dess lägsta detektionsgräns är 0,03 Ehrlich-enheter per milliliter (EU / ml). Kromogena och turbidimetriska tester upptäcker endotoxiner inom 0,005 EU / ml. Säkerhetsparametrar skiljer sig mycket beroende på ämnet som testas. Även om sterilt vatten som används för injektions- eller bevattningsändamål inte kan innehålla högst 0,25 EU / ml, kan sterilt vatten för inandningsändamål innehålla upp till 0,5 EU / ml.