Co je test ubikvitinace?

Ubikvitinace se týká vazby proteinu ubikvitinu na jiné proteiny třemi různými enzymy. Test ubikvitinace je test, který určuje, jak hodně z tohoto procesu se děje v buňce. Testy mohou být použity k určení toho, jak různé podmínky ovlivňují vazbu proteinu, kroky a struktury, které jsou důležité v ubikvitinační cestě, a množství proteinu v buňce. S vývojem mnoha různých nemocí bylo spojeno nepřiměřené nebo nadměrné množství.

Protein nalezený v buňkách, funkce ubiquitinu je vázat se na proteiny, zatímco funguje jako „značka“ nebo signál k jiným strukturám. Tato „značka“ potom signalizuje enzymům, že vědí, že protein může být zničen, recyklován nebo přemístěn. Výsledkem je destrukce nebo transport proteinů.

Tyto značkovací proteiny jsou důležité pro opravu DNA, virové infekce a imunitní odpověď. Mezi další důležité funkce patří role v buněčné smrti, buněčné dělení a vývoj buněk. Příliš mnoho ubiquitinu nebo jeho nedostatek může hrát roli při tvorbě mnoha nemocí, jako je rakovina, genetické poruchy a nemoci imunitního systému.

Vědci budou používat ubikvitinační test, aby se pokusili určit, které podmínky mění koncentraci proteinu v buňce a porovnávají nemocné buňky se zdravými buňkami. Vědci jej také používají ke zkoumání, jaké podmínky způsobí změny ve vazbě. Navíc se mohou pokusit propojit specifický kód DNA s množstvím enzymů v buňce.

Existuje více než jeden typ testu ubikvitinace, který vědci konkrétně používají. Jeden určí procenta proteinů, které jsou vázány ubikvintinem. Další zkoumá aktivitu enzymů nebo přítomnost dalších meziproduktů nalezených v ubikvinační cestě. Různé testy jsou vyvíjeny na základě cílového proteinu, na který se ubikvitin váže.

Základem ubikvitinačního testu je začlenění sloučeniny, která je značena pomocí jiné snadno měřitelné chemikálie. V onkologických testech může být ubikvitin značen kryptátem, sloučeninou, která obsahuje dva atomy dusíku. To lze použít ke stanovení, který enzym je v buňce nejaktivnější.

Test ubikvitinace bude mít dva kroky. Prvním je enzymatický krok, ve kterém se enzymy váží značený ubikvitin na cílový protein. Druhým je detekční krok, ve kterém je zkoumána vazba cílového proteinu pomocí konjugátu, jako je protilátka. Protilátka bude fluoreskovat nebo měnit barvu, což pak umožní výzkumníkovi určit aktivitu enzymů.