ユビキチン化アッセイとは何ですか？

ユビキチン化とは、3つの異なる酵素によるタンパク質ユビキチンの他のタンパク質への結合を指します。ユビキチン化アッセイは、セル内でこのプロセスのどれだけが発生するかを決定するテストです。テストを使用して、異なる条件がタンパク質の結合、ユビキチンネーション経路で重要なステップと構造、および細胞内のタンパク質の量にどのように影響するかを判断できます。不十分または過剰な量は、多くの異なる疾患の発症に関連しています。

細胞に見られるタンパク質、ユビキチンの機能は、他の構造への「タグ」または信号として機能しながらタンパク質に結合することです。この「タグ」は、タンパク質を破壊、リサイクル、または移動できることを知るために酵素を知らせます。その結果、タンパク質の破壊または輸送が可能です。

これらのタグ付けタンパク質は、DNA修復、ウイルス感染、免疫応答に重要です。他の重要な機能には、細胞死、細胞分裂、細胞の発達における役割が含まれます。あまりにもmuChユビキチン、またはその欠如は、癌、遺伝障害、免疫系の疾患など、多くの疾患の形成に役割を果たす可能性があります。

研究者は、ユビキチン化アッセイを使用して、細胞内のタンパク質の濃度を変化させ、病気の細胞と健康な細胞を比較する条件を決定しようとします。科学者はまた、どの条件が結合の変化を引き起こすかを調査するために使用します。さらに、特定のDNAコードを細胞内の酵素の量にリンクしようとする場合があります。

研究科学者が特に使用するユビキチン化アッセイは複数あります。 1つは、ユビキンティンと結合したタンパク質の割合を決定します。 別の人は、酵素の活性またはユビキン化経路で見つかった他の中間体の存在を調べます。ユビキチンが結合する標的タンパク質に基づいて、異なるアッセイが開発されています。

ユビキチン化アッセイの基礎は、別の測定された化学物質を使用して標識される化合物を組み込むことです。腫瘍学的アッセイでは、ユビキチンは、2つの窒素原子を含む化合物であるクリプト酸塩で標識できます。これは、どの酵素が細胞で最も活性があるかを判断するために使用できます。

ユビキチン化アッセイには2つのステップがあります。 1つ目は、酵素が標識されたユビキチンを標的タンパク質に結合する酵素ステップです。 2つ目は、抗体などの共役を使用して標的タンパク質の結合を調べる検出ステップです。抗体は蛍光または色を変化させるため、研究者は酵素の活性を決定することができます。