Vad är en ubiquitination -analys?
ubiquitination avser bindningen av proteinet ubiquitin till andra proteiner med tre olika enzymer. En ubiquitinationsanalys är ett test som bestämmer hur mycket av denna process som inträffar i cellen. Tester kan användas för att bestämma hur olika förhållanden påverkar proteinbindning, steg och strukturer som är viktiga i ubiquitination -vägen och mängden protein i cellen. Otillräckliga eller överflödiga mängder har kopplats till utvecklingen av många olika sjukdomar.
Ett protein som finns i celler, funktionen av ubiquitin är att binda till proteiner medan du fungerar som en "tagg" eller signal till andra strukturer. Denna "tagg" signalerar sedan enzymer för att veta att proteinet kan förstöras, återvinnas eller flyttas. Resultatet är förstörelse eller transport av proteiner.
Dessa taggningsproteiner är viktiga för DNA -reparation, virala infektioner och immunsvar. Andra viktiga funktioner inkluderar roller i celldöd, celldivision och utveckling av celler. För muCh ubiquitin, eller brist på detta, kan spela en roll i bildandet av många sjukdomar, såsom cancer, genetiska störningar och sjukdomar i immunsystemet.
Forskare kommer att använda en ubiquitinationsanalys för att försöka bestämma vilka förhållanden som förändrar koncentrationen av proteinet i cellen och jämför sjuka celler med friska celler. Forskare använder det också för att undersöka vilka förhållanden som kommer att orsaka bindning. Dessutom kan de försöka länka specifik DNA -kod till mängden enzymer i cellen.
Det finns mer än en typ av ubiquitinationsanalys som forskningsforskare specifikt använder. En kommer att bestämma procentandelen proteiner som är bundna med ubiquintin. En annan undersöker aktiviteten hos enzymer eller närvaron av andra mellanprodukter som finns i ubikinationsvägen. Olika analyser utvecklas baserat på målproteinet som ubiquitin kommer att binda till.
Grunden för en ubiquitinationsanalys är att integrera en förening som är märkt med hjälp av en annan lättmätt kemikalie. I onkologianalyser kan ubiquitin märkas med kryptat, en förening som innehåller två kväveatomer. Detta kan användas för att bestämma vilket enzym som är mest aktivt i cellen.
En ubiquitinationsanalys kommer att ha två steg. Den första är ett enzymatiskt steg där enzymer kommer att binda det märkta ubiquitinet till målproteinet. Den andra är ett detekteringssteg där bindning av målproteinet undersöks med hjälp av ett konjugat såsom en antikropp. Antikroppen kommer att fluorescera eller ändra färg, vilket gör det möjligt för forskaren att bestämma enzymernas aktivitet.