O que é um ensaio de ubiquitinação?
ubiquitinação refere -se à ligação da proteína ubiquitina a outras proteínas por três enzimas diferentes. Um ensaio de ubiquitinação é um teste que determina quanto desse processo ocorre dentro da célula. Os testes podem ser usados para determinar como diferentes condições afetam a ligação das proteínas, etapas e estruturas importantes na via da ubiquitinação e a quantidade de proteína na célula. Quantidades inadequadas ou superabundantes foram associadas ao desenvolvimento de muitas doenças diferentes.
Uma proteína encontrada nas células, a função da ubiquitina é se ligar a proteínas enquanto funcionam como uma "tag" ou sinaliza para outras estruturas. Essa "tag" sinaliza enzimas para saber que a proteína pode ser destruída, reciclada ou movida. O resultado é a destruição ou transporte de proteínas.
Essas proteínas de marcação são importantes para reparo de DNA, infecções virais e resposta imune. Outras funções importantes incluem papéis na morte celular, divisão celular e desenvolvimento de células. Muito muA ubiquitina, ou a falta dela, pode desempenhar um papel na formação de muitas doenças, como câncer, distúrbios genéticos e doenças do sistema imunológico.
Os pesquisadores usarão um ensaio de ubiquitinação para tentar determinar quais condições alterarão a concentração da proteína na célula e comparando células doentes com células saudáveis. Os cientistas também o usam para investigar quais condições causarão mudanças na ligação. Além disso, eles podem tentar vincular código de DNA específico à quantidade de enzimas na célula.
Há mais de um tipo de ensaio de ubiquitinação que os cientistas de pesquisa usam especificamente. Um determinará a porcentagem de proteínas que estão ligadas à ubiquintina. Outro examina a atividade das enzimas ou a presença de outros intermediários encontrados na via ubiquinação. Ensaios diferentes são desenvolvidos com base na proteína alvo à qual a ubiquitina se ligará.
A base de um ensaio de ubiquitinação é incorporar um composto rotulado usando outro produto químico facilmente medido. Nos ensaios de oncologia, a ubiquitina pode ser rotulada com cripta, um composto que contém dois átomos de nitrogênio. Isso pode ser usado para determinar qual enzima é mais ativa na célula.
Um ensaio de ubiquitinação terá duas etapas. O primeiro é uma etapa enzimática em que as enzimas se ligarão a ubiquitina marcada à proteína alvo. O segundo é uma etapa de detecção na qual a ligação da proteína alvo é examinada usando um conjugado como um anticorpo. O anticorpo fluorescerá ou alterará a cor, que permite ao pesquisador determinar a atividade das enzimas.