¿Qué es un plásmido recombinante?
Un plásmido es una pieza circular de ADN que se encuentra en muchas bacterias. La característica más notable de los plásmidos es que se replican independientemente del ADN principal del huésped. A menudo, se utiliza un plásmido en la tecnología de clonación recombinante para clonar genes recién aislados. También es muy común usar un plásmido recombinante para expresar grandes cantidades de un gen conocido para obtener ARN o proteína de él. Dicha expresión génica recombinante ha sido indispensable para la industria de la biotecnología.
Los plásmidos recombinantes se desarrollaron por primera vez en la rata de laboratorio del mundo bacteriano, Escherichia coli . Muchos otros tipos de bacterias pueden albergar tales plásmidos. Estos bits de ADN auto-replicante pueden transferir naturalmente entre diferentes tipos de bacterias. A pesar de esto, a veces era difícil introducir los plásmidos recombinantes en otros tipos de bacterias.
El procedimiento principal para introducir el ADN en otras células se conoce como transformación, en la que las bacterias se tratan con productos químicos que hacenEs más probable que tomen ADN extranjero. Otra técnica implica impulsar la bacteria con una corriente eléctrica. Esto se conoce como electroporación.
razones para crear un plásmido recombinante varía. A menudo, cuando el ADN se aísla primero de un tejido u organismo particular, se transforma en plásmidos para crear una biblioteca. Entonces el ADN se puede extraer de colonias individuales. A continuación, se pueden seleccionar mediante secuenciación de ADN para determinar qué tipos de genes están presentes, si las secuencias están presentes en una base de datos. A veces se clonan los genes con funciones desconocidas.
En otros casos, el producto génico es bien conocido, pero los investigadores desean expresar grandes cantidades de él para un estudio adicional. El gen puede clonarse en plásmidos recombinantes que son vectores de sobreexpresión. Están diseñados especialmente para producir grandes cantidades de ARN o proteína. Esto ha sido particularmente valioso para humanos recombinantesLas proteínas, que anteriormente solo estaban disponibles en cadáveres, lo que hace que sea muy difícil estudiar la función de un gen particular.
Varios factores están involucrados en la construcción de un plásmido que puede usarse en la clonación molecular. El plásmido debe tener un marcador seleccionable. Esto permite seleccionar una celda con el gen. Normalmente, la población de células que carecen del gen con el marcador en gran medida fuera de la cantidad de células que lo llevan. En general, un plásmido recombinante tiene resistencia a un antibiótico, o puede crecer en ausencia de un aminoácido particular.
Tal plásmido necesita un origen de replicación para que pueda comenzar a sintetizar su ADN recombinante. Además, un plásmido recombinante requiere un conjunto de secuencias especiales para permitir que una enzima de restricción escinda el ADN para permitir que un gen se inserte en el vector de clonación. Hay una gran cantidad de enzimas de restricción que están altamente especializadas para secuencias de ADN específicas que deben estar presentes donde el gen St.Artes y extremos.
Las cepas tradicionales de bacterias se han utilizado para la clonación de ADN durante décadas. Además, hay nuevos kits que utilizan cepas bacterianas especialmente construidas para facilitar la sobreexpresión del producto génico. Combinan la tecnología para clonar un gen con un método que permite una fácil purificación de la proteína expresada a partir del gen una vez que se ha clonado en el plásmido recombinante.