O que é um plasmídeo recombinante?
Um plasmídeo é uma peça circular de DNA encontrada em muitas bactérias. A característica mais notável dos plasmídeos é que eles replicam independentemente do DNA principal do host. Freqüentemente, um plasmídeo é usado na tecnologia de clonagem recombinante para clonar genes recém -isolados. Também é muito comum usar um plasmídeo recombinante para expressar grandes quantidades de um gene conhecido para obter RNA ou proteína dele. Essa expressão gênica recombinante tem sido indispensável para a indústria da biotecnologia.
Plasmídeos recombinantes foram desenvolvidos pela primeira vez no rato de laboratório do mundo bacteriano, Escherichia coli . Muitos outros tipos de bactérias podem abrigar esses plasmídeos. Esses bits de DNA de auto-replicação podem transferir naturalmente entre diferentes tipos de bactérias. Apesar disso, às vezes era difícil introduzir os plasmídeos recombinantes em outros tipos de bactérias.
O procedimento principal para introduzir o DNA em outras células é conhecido como transformação, no qual as bactérias são tratadas com produtos químicos que fazemeles são mais propensos a adotar DNA estrangeiro. Outra técnica envolve chocar as bactérias com uma corrente elétrica. Isso é conhecido como eletroporação.
As razões para a criação de um plasmídeo recombinante variam. Muitas vezes, quando o DNA é primeiro isolado de um tecido ou organismo específico, é transformado em plasmídeos para criar uma biblioteca. Então o DNA pode ser extraído de colônias individuais. Em seguida, eles podem ser rastreados por sequenciamento de DNA para determinar quais tipos de genes estão presentes, se as seqüências estiverem presentes em um banco de dados. Às vezes, genes com funções desconhecidas são clonadas.
Em outros casos, o produto genético é bem conhecido, mas os pesquisadores desejam expressar grandes quantidades para estudos adicionais. O gene pode ser clonado em plasmídeos recombinantes que são vetores superexpressionados. Eles são projetados especialmente para produzir grandes quantidades de RNA ou proteína. Isso tem sido particularmente valioso para o humano recombinanteProteínas, que anteriormente estavam disponíveis apenas nos cadáveres, dificultando muito estudar a função de um gene específico.
Vários fatores estão envolvidos na construção de um plasmídeo que pode ser usado na clonagem molecular. O plasmídeo deve ter um marcador selecionável. Isso torna possível selecionar uma célula com o gene. Normalmente, a população de células sem o gene com o marcador superou bastante a quantidade de células que o carregam. Geralmente, um plasmídeo recombinante tem resistência a um antibiótico ou pode crescer na ausência de um determinado aminoácido.
Esse plasmídeo precisa de uma origem da replicação para que possa começar a sintetizar seu DNA recombinante. Além disso, um plasmídeo recombinante requer um conjunto de sequências especiais para permitir que uma enzima de restrição clivie o DNA para permitir que um gene seja inserido no vetor de clonagem. Há um grande número de enzimas de restrição que são altamente especializadas para sequências de DNA específicas que devem estar presentes onde o gene stArtes e fins.
cepas tradicionais de bactérias têm sido usadas para clonagem de DNA por décadas. Além disso, existem novos kits que usam cepas bacterianas especialmente construídas para facilitar a super expressão do produto genético. Eles combinam a tecnologia para clonar um gene com um método que permite facilitar a purificação da proteína expressa a partir do gene, uma vez que ele foi clonado no plasmídeo recombinante.