電気泳動移動度シフトアッセイとは何ですか？

アッセイは、細胞の元の部分を識別しやすい部分に分離するように設計されたテストです。 電気泳動移動度シフトアッセイは、電気を使用して、タンパク質などの高分子をゲルマトリックス内で移動させ、サイズに基づいて異なる高分子を分離する実験です。 カーバッテリーのように、マイナスとプラスの端は電気泳動移動度シフトアッセイ、またはゲルシフトアッセイの反対側にあります。 これにより、電荷に基づいて電気が高分子を引き付けます。 小さいものはゲルからの干渉が少ないため、各高分子は異なる速度で動きます。

電気泳動移動度シフトアッセイを設定するには、いくつかの手順が必要です。 分離する必要がある高分子を最初に準備する必要があります。 ほとんどの高分子は生細胞から得られ、特定の手順が必要です。 分離する部品を入手するには、多くの場合、遠心分離と細胞を破壊する化学反応が必要です。 遠心分離機はバイアルを高速で回転させ、必要な高分子のペレットを形成します。 これは溶解され、多くの場合、ゲルシフトアッセイの追跡を支援するために色または他のラベルが追加されます。

ベッドと呼ばれることもあるゲルは、液体アガロースと液体からゲルにすばやく変化する粉末アガロースと水の正確な混合物から作り直さなければなりません。 一般に、電気泳動移動度シフトアッセイには、異なる高分子混合物を比較するために使用される個別のアッセイ用の複数のレーンがあります。 1つのレーンは常にコントロールとして設定され、通常は1種類の高分子のみを持ちます。

電源は慎重に選択する必要があり、すべての準備ができるまで接続されません。 電源がオンになっている時間が、高分子の移動度シフトを決定します。 適切な分析を行うために、断片を十分に分離することが重要です。 パワーのタイミングが適切でない場合、将来の比較も不正確になります。 高分子の方向は、それらが自然に持つ電荷によって決まります。ほとんどの電荷は負の方向に移動します。

単純な遺伝子検査とタンパク質分析は、一般に電気泳動移動度シフトアッセイで行われます。 これは、異なるレーンの異なるシフトによって表示されます。 相互作用が発生すると、巨大分子は結合し、1つの高分子のみを含むコントロールレーンと比較して、マトリックス内をより遅く移動します。 ゲルシフトアッセイは、複雑な方法の完了に時間がかかる可能性のある遺伝的結果を迅速に排除または確認するために使用されます。 また、免疫系高分子である抗体が細菌やウイルスと戦うために使用できるタンパク質に付​​着しているかどうかを判断することもできます。