O que é um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética?
Um ensaio é um teste desenvolvido para separar as peças originais de uma célula em partes fáceis de identificar. O ensaio de mudança de mobilidade eletroforética é um experimento que usa eletricidade para mover macromoléculas, como proteínas, através de uma matriz de gel para causar uma separação entre as diferentes macromoléculas com base no tamanho. Como uma bateria de carro, as extremidades positiva e negativa estão em lados opostos do ensaio de mudança de mobilidade eletroforética ou ensaio de mudança de gel. Isso faz com que a eletricidade atraia as macromoléculas com base na carga. Cada macromolécula se move a uma taxa diferente, pois as menores experimentam menos interferência do gel.
São necessárias várias etapas para configurar um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética. As macromoléculas que precisam ser separadas devem ser preparadas primeiro. A maioria das macromoléculas é obtida de células vivas e requer procedimentos específicos. A obtenção das peças a serem separadas geralmente requer uma centrífuga e uma reação química que quebre as células. A centrífuga girará um frasco em alta velocidade e formará um pellet das macromoléculas necessárias. Isso é dissolvido e geralmente uma cor ou outro rótulo é adicionado para ajudar a rastrear o ensaio de troca de gel.
O gel, às vezes chamado de cama, também deve ser feito de uma mistura precisa de agarose em pó e água que passa rapidamente de líquido para gel. Geralmente, um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética terá várias faixas para ensaios separados, que são usados para comparar diferentes misturas de macromoléculas. Uma pista é sempre definida como controle e geralmente possui apenas um tipo de macromolécula.
A fonte de energia deve ser selecionada com cuidado e não será conectada até que tudo esteja pronto. A quantidade de tempo que a energia está ligada determina a mudança de mobilidade das macromoléculas. É importante separar as peças o suficiente para uma análise adequada. Se a energia não estiver no tempo adequado, comparações futuras também serão imprecisas. A direção das macromoléculas será determinada pela carga que elas possuem naturalmente - a maioria se move para o lado negativo.
Testes genéticos simples e análises de proteínas são comumente feitos com um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética. Isso é exibido por turnos diferentes em faixas diferentes. Se ocorrer uma interação, as macromoléculas combinam e correm mais devagar pela matriz em comparação com a pista de controle com apenas uma macromolécula. Os ensaios de troca de gel são usados para eliminar ou confirmar rapidamente resultados genéticos que métodos complicados podem levar mais tempo para serem concluídos. Eles também podem determinar se os anticorpos, uma macromolécula do sistema imunológico, aderem às proteínas que podem ser usadas para combater bactérias e vírus.