O que é um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética?
Um ensaio é um teste projetado para separar as peças originais de uma célula em peças que são fáceis de identificar. O ensaio de mudança de mobilidade eletroforética é um experimento que usa eletricidade para mover macromoléculas, como proteínas, através de uma matriz de gel para causar uma separação entre as diferentes macromoléculas com base no tamanho. Como uma bateria de carro, as extremidades negativas e positivas estão em lados opostos do ensaio de mudança de mobilidade eletroforética ou ensaio de mudança de gel. Isso faz com que a eletricidade atraia as macromoléculas com base na carga. Cada macromolécula se move a uma taxa diferente, pois os menores experimentam menos interferência do gel.
Várias etapas são necessárias para configurar um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética. As macromoléculas que precisam ser separadas devem ser preparadas primeiro. A maioria das macromoléculas é obtida de células vivas e requer procedimentos específicos. A obtenção das peças a serem separadas geralmente requer uma centrifugação e uma reação química que quebre as células. A centrífugagirará um frasco em alta velocidade e formará um pellet das macromoléculas necessárias. Isso é dissolvido e, muitas vezes, uma cor ou outra etiqueta é adicionada para ajudar a rastrear o ensaio de mudança de gel.
O gel, às vezes chamado de cama, também deve ser feito recentemente de uma mistura precisa de agarose e água em pó que giram rapidamente de líquido para gel. Geralmente, um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética tem várias faixas para ensaios separados, que são usados para comparar diferentes misturas de macromoléculas. Uma pista é sempre definida como um controle e geralmente tem apenas um tipo de macromolécula.
A fonte de energia deve ser selecionada com cuidado e não está conectada até que tudo esteja pronto. A quantidade de tempo em que a energia está em dia determina a mudança de mobilidade das macromoléculas. É importante separar as peças o suficiente para uma análise adequada. Se a energia não for cronometrada adequadamente, as comparações futuras também serão imprecisas.A direção das macromoléculas será determinada pela carga que possui naturalmente - a maioria se move em direção à extremidade negativa.
testes genéticos simples e análises de proteínas são geralmente feitas com um ensaio de mudança de mobilidade eletroforética. Isso é exibido por diferentes mudanças em diferentes faixas. Se ocorrer uma interação, as macromoléculas se combinam e correm mais lentamente através da matriz em comparação com a faixa de controle com apenas uma macromolécula. Os ensaios de mudança de gel são usados para eliminar ou confirmar rapidamente resultados genéticos que métodos complicados podem levar mais tempo para serem concluídos. Eles também podem determinar se os anticorpos, uma macromolécula do sistema imunológico, aderem a proteínas que podem ser usadas para combater bactérias e vírus.