Was ist ein elektrophoretischer Mobilitätstest?
Ein Assay ist ein Test, bei dem die Originalteile einer Zelle in leicht zu identifizierende Teile zerlegt werden. Electrophoretic Mobility Shift Assay ist ein Experiment, bei dem Makromoleküle wie Proteine mithilfe von Elektrizität durch eine Gelmatrix bewegt werden, um eine Trennung zwischen den verschiedenen Makromolekülen basierend auf der Größe zu bewirken. Wie bei einer Autobatterie befinden sich die negativen und positiven Enden auf entgegengesetzten Seiten des elektrophoretischen Mobilitäts-Shift-Assays oder Gel-Shift-Assays. Dies bewirkt, dass Elektrizität die Makromoleküle basierend auf Ladung anzieht. Jedes Makromolekül bewegt sich unterschiedlich schnell, da kleinere Moleküle weniger Störungen durch das Gel erfahren.
Es sind mehrere Schritte erforderlich, um einen elektrophoretischen Mobilitätstest durchzuführen. Die zu trennenden Makromoleküle müssen zuerst hergestellt werden. Die meisten Makromoleküle werden aus lebenden Zellen gewonnen und erfordern spezielle Verfahren. Um die zu trennenden Teile zu erhalten, sind häufig eine Zentrifuge und eine chemische Reaktion erforderlich, die die Zellen zersetzt. Die Zentrifuge dreht ein Fläschchen mit hoher Geschwindigkeit und bildet ein Pellet der benötigten Makromoleküle. Dies wird aufgelöst und oft wird eine Farbe oder ein anderes Etikett hinzugefügt, um den Gel-Shift-Assay zu verfolgen.
Das Gel, manchmal auch Bett genannt, muss auch frisch aus einer präzisen Mischung aus pulverisierter Agarose und Wasser hergestellt werden, die sich schnell von flüssig zu gelieren beginnt. Üblicherweise weist ein elektrophoretischer Mobilitätsverschiebungstest mehrere Spuren für separate Tests auf, die zum Vergleichen verschiedener Makromolekülmischungen verwendet werden. Eine Spur dient immer als Kontrolle und hat normalerweise nur eine Art von Makromolekülen.
Die Stromquelle sollte sorgfältig ausgewählt und erst dann angeschlossen werden, wenn alles bereit ist. Die Einschaltdauer bestimmt die Verschiebung der Beweglichkeit der Makromoleküle. Es ist wichtig, die Teile so weit zu trennen, dass eine ordnungsgemäße Analyse möglich ist. Wenn die Leistung nicht richtig eingestellt ist, sind auch zukünftige Vergleiche ungenau. Die Richtung der Makromoleküle wird durch ihre natürliche Ladung bestimmt - die meisten bewegen sich in Richtung des negativen Endes.
Einfache genetische Tests und Proteinanalysen werden üblicherweise mit einem elektrophoretischen Mobilitätstest durchgeführt. Dies wird durch unterschiedliche Verschiebungen in verschiedenen Spuren angezeigt. Bei einer Wechselwirkung verbinden sich die Makromoleküle und laufen langsamer durch die Matrix als die Kontrollspur mit nur einem Makromolekül. Gel-Shift-Assays werden verwendet, um genetische Ergebnisse schnell zu eliminieren oder zu bestätigen, deren Durchführung komplizierter Methoden länger dauern könnte. Sie können auch bestimmen, ob Antikörper, ein Makromolekül des Immunsystems, an Proteinen haften, die zur Bekämpfung von Bakterien und Viren eingesetzt werden können.