Hvad er en elektroforetisk mobilitetsskiftanalyse?

Et assay er en test designet til at adskille en celles originale stykker i dele, der er lette at identificere. Elektroforetisk mobilitetsskiftanalyse er et eksperiment, der bruger elektricitet til at flytte makromolekyler, ligesom proteiner, gennem en gelmatrix for at forårsage en adskillelse mellem de forskellige makromolekyler baseret på størrelse. Som et bilbatteri er de negative og positive ender på modsatte sider af den elektroforetiske mobilitetsskiftanalyse eller gelskiftanalyse. Dette får elektricitet til at tiltrække makromolekylerne baseret på opladning. Hver makromolekyle bevæger sig i en anden hastighed, da mindre dem oplever mindre interferens fra gelen.

Flere trin er påkrævet for at oprette et elektroforetisk mobilitetsskiftassay. De makromolekyler, der skal adskilles, skal først udarbejdes. De fleste makromolekyler opnås fra levende celler og kræver specifikke procedurer. At få delene, der skal adskilles, kræver ofte en centrifuge og en kemisk reaktion, der nedbryder cellerne. Centrifugen spinder et hætteglas med høj hastighed og danner en pellet af de nødvendige makromolekyler. Dette opløses, og ofte tilføjes en farve eller en anden etiket for at hjælpe med at spore gelskiftanalysen.

Gelen, som undertiden kaldes sengen, skal også være frisk fremstillet af en præcis blanding af pulveriseret agarose og vand, der hurtigt omdannes fra væske til gel. Almindeligvis vil et elektroforetisk mobilitetsskiftassay have adskillige baner til separate assays, der bruges til at sammenligne forskellige makromolekyleblandinger. Den ene bane indstilles altid som kontrol og har normalt kun en slags makromolekyle.

Strømkilden skal vælges omhyggeligt og ikke tilsluttes, før alt er klar. Mængden af ​​tid, der tændes for strømmen, bestemmer makromolekylernes mobilitetsskifte. Det er vigtigt at adskille stykkerne nok til korrekt analyse. Hvis strømmen ikke er korrekt rettet, vil fremtidige sammenligninger også være unøjagtige. Makromolekylernes retning bestemmes af, hvilken ladning de besidder naturligt - de fleste bevæger sig mod den negative ende.

Enkle genetiske test og proteinanalyser udføres ofte med en elektroforetisk mobilitetsskiftanalyse. Dette vises ved forskellige skift i forskellige baner. Hvis der opstår en interaktion, kombineres og løber makromolekylerne langsommere gennem matrixen sammenlignet med kontrolbanen med kun et makromolekyle. Gelskiftanalyser bruges til hurtigt at eliminere eller bekræfte genetiske resultater, som komplicerede metoder kan tage længere tid at gennemføre. De kan også bestemme, om antistoffer, et immunsystemmakromolekyle, klæber til proteiner, der kan bruges til at bekæmpe bakterier og vira.