등전점은 무엇입니까?

단백질은 아미노산 사슬로 구성되며 각각 아미노산 값이 다릅니다. 단백질의 전체 pH는 이들이 용해되는 특정 용액에서 이온을 형성 할 때 개별 아미노산의 pH 값의 혼합물로 구성된다. 단백질의 등전점 (pI)은 단백질에 순 전하가없는 pH입니다. 이 특성은 이종 혼합물에서 다른 단백질로부터 공지 된 pI를 갖는 단백질을 분리하기 위해 이용 될 수있다.

아미노산은 염기성이며 높은 pH를 갖는 아미노 말 단기를 갖는다. 아미노산의 다른 쪽 끝은 pH가 낮은 산성 인 카르 복실 말단입니다. 상이한 pH 값에서, 단백질상의 아미노산은 전하가 다양 할 것이다. 등전점 이하의 단백질은 양전하를 have니다. 대조적으로,이 점을 넘는 사람들은 음전하를 have니다.

단백질 정제를위한 등전점에 대한 지식을 이용하기 위해, 단백질 혼합물에 전기장을가한다. 이것은 일반적으로 아가 로스 또는 폴리 아크릴 아미드 겔에서 이루어지며 등전 포커싱으로 알려져 있습니다. 오래된 기술은 각 끝에 전극이있는 수 크로스 용액을 사용하여 유리 기둥에서 큰 규모로 절차를 수행하는 것입니다. 일관된 pH 구배를 형성하는 양쪽 성액이라고 불리는 화합물이 첨가됩니다. 겔 또는 컬럼에 전류가 가해지면 단백질이 등전점에 도달 할 때까지 이동 한 다음 정지 상태를 유지합니다.

겔상의 단백질은 일반적으로 단백질에 결합하는 염료에 의해 가시화된다. 때로는 효소를 연구하는 경우 착색 반응을 일으키는 기질을 사용할 수 있습니다. 일반적으로 등전점으로 알려진 단백질을 가진 표준이 사용됩니다.

원하는 단백질의 위치를 ​​알고 나면 일반적인 기술은 겔에서 분리 된 단백질을 절단하는 것입니다. 이어서 단백질을 정제하고 서열 분석 할 수있다. 일단 서열이 알려지면, 중합 효소 연쇄 반응 (pcr)을위한 프라이머를 설계하는데 사용될 수 있고, 적합한 핵산 물질이 이용 가능하다면 단백질에 대한 유전자를 클로닝하는데 사용될 수있다.

등전 초점은 밀접하게 관련된 단백질을 분석하여 단백질이 얼마나 다른지 확인하는 일반적인 방법입니다. 하나의 합병증은 단백질에 설탕이 결합되어있을 수 있다는 것입니다. 이것을 글리코 실화라고하며 단백질의 pI에 영향을 줄 수 있습니다. 실제로는 다르게 글리코 실화 된 하나의 단백질이있을 때, 등전점이 다른 여러 단백질이있는 것처럼 보일 수 있습니다. 크로마토 그래피와 같은 표준 방법으로 정제 된 단백질은 때때로 순도를 보장하기 위해 등전점 포커싱으로 분석됩니다.