등전 지점은 무엇입니까?

단백질은 아미노산 사슬로 구축되며, 각각은 상이한 pH 값을 갖는다. 단백질의 전체 pH는 이들이 용해되는 특정 용액에서 이온을 형성함에 따라 개별 아미노산의 pH 값의 혼합물로 구성된다. 단백질의 등전점 (PI)은 그 단백질에 순 전하가없는 pH입니다. 이 특성은 이종 혼합물에서 다른 단백질로부터 알려진 PI로 단백질을 분리하기 위해 이용 될 수있다. 아미노산의 다른 쪽 끝은 산성 인 카르 복실 말단이다. 다른 pH 값에서, 단백질의 아미노산은 이들의 전하가 다를 것이다. 그들의 등전 지점 아래의 단백질은 양전하를 갖는다. 대조적으로,이 시점 위의 것들은 음전하를 갖는다.

p에 대한 등전점에 대한 지식을 이용하려면로테 틴 정제, 단백질의 혼합물에 전기장이 적용된다. 이것은 일반적으로 아가 로스 또는 폴리 아크릴 아미드 겔에서 수행되며 등전 초점으로 알려져 있습니다. 오래된 기술은 양쪽 끝에 전극이있는 자당의 용액을 사용하여 유리 컬럼에서 더 큰 규모로 절차를 수행하는 것입니다. 일관된 pH 구배의 형성을 유발하는 양서류라는 화합물이 첨가된다. 겔 또는 컬럼이 전류에 노출되면 단백질은 등전 지점에 도달 할 때까지 이동 한 다음 고정 상태를 유지합니다.

겔상의

단백질은 일반적으로 단백질에 결합하는 염료에 의해 볼 수있다. 때때로, 효소가 연구되는 경우, 착색 반응을주는 기질을 사용할 수있다. 일반적으로 표준은 알려진 등전 지점의 단백질을 갖는 표준이 사용됩니다.

일단 원하는 단백질이 어디에 있는지 알면 일반적인 기술은 겔에서 분리 된 단백질을 절단하는 것입니다. 이어서, 단백질을 정제하고 시퀀싱 할 수있다. 일단 시퀀스CE는 알려져 있다면, 중합 효소 연쇄 반응 (PCR)을위한 프라이머를 설계하는 데 사용될 수 있으며 적합한 핵산 물질이 이용 가능한 경우 단백질의 유전자를 복제하는 데 사용됩니다.

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등전 초점은 또한 밀접하게 관련된 단백질을 분석하여 서로 다른 방법을 확인하는 일반적인 방법입니다. 한 가지 합병증은 단백질이 설탕에 결합 될 수 있다는 것입니다. 이것을 글리코 실화라고하며 단백질의 PI에 영향을 줄 수 있습니다. 다른 등전점을 가진 여러 단백질이있는 것처럼 보일 수 있습니다. 크로마토 그래피와 같은 표준 방법에 의해 정제 된 단백질은 때때로 그들의 순도를 보장하기 위해 등전 초점에 의해 분석됩니다.