Hva er det isoelektriske punktet?

Proteiner er bygget av kjeder av aminosyrer, som hver har forskjellige pH -verdier.Den totale pH i proteinet er sammensatt av blandingen av pH -verdiene til de individuelle aminosyrene når de danner ioner i den spesielle løsningen de blir oppløst i.Det isoelektriske punktet (PI) av et protein er pH som det proteinet ikke har noen nettladning.Denne egenskapen kan utnyttes for å skille proteinet med den kjente PI fra andre proteiner i en heterogen blanding.

aminosyrer har en aminoteterminal som er grunnleggende, og har en høy pH.Den andre enden av aminosyren er karboksylterminalen som er sur, med lav pH.Ved forskjellige pH -verdier vil aminosyrene på proteinene variere i ladningene sine.Proteiner under deres isoelektriske punkt har en positiv ladning.Derimot har de over dette punktet en negativ ladning.

For å utnytte kunnskap om det isoelektriske punktet for proteinrensing, blir en blanding av proteiner utsatt for et elektrisk felt.Dette gjøres ofte i agarose- eller polyakrylamidgeler, og er kjent som isoelektrisk fokusering.En eldre teknikk er å utføre prosedyren i større skala i en glasskolonne ved bruk av en løsning av sukrose med elektroder i hver ende.Forbindelser kalt amfolytter tilsettes som forårsaker dannelse av en konsistent pH -gradient.Når gelen eller kolonnen blir utsatt for den elektriske strømmen, vandrer proteinene til de når sitt isoelektriske punkt, og forblir deretter stasjonære.

proteiner på geler blir generelt synliggjort av et fargestoff som binder proteiner.Noen ganger, hvis enzymer blir studert, kan et underlag brukes som gir en farget reaksjon.Vanligvis brukes standarder som har proteiner av kjente isoelektriske punkter.

Når man først vet hvor det ønskede proteinet er lokalisert, er en vanlig teknikk å kutte det isolerte proteinet ut av gelen.Proteinet kan deretter renses og sekvenseres.Beslektede proteiner for å se hvor forskjellige de er fra hverandre.En komplikasjon kan være at proteiner kan ha sukker bundet til dem.Dette kalles glykosylering og kan påvirke proteinets PI.Det kan se ut som det er flere proteiner med forskjellige isoelektriske punkter, når det faktisk bare er ett protein som har vært differensielt glykosylert.Proteiner renset ved standardmetoder som kromatografi blir noen ganger analysert ved isoelektrisk fokusering for å sikre deres renhet.